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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » G418筛选Hela 细胞
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veronica5129

铜虫 (初入文坛)

[交流] G418筛选Hela 细胞

虫友们好！我用质粒转染Hela cell,转然2天后开始用G418筛选，筛选浓度600ug/ml.根据文献报道，2周即可筛选出细胞克隆。我在筛选第12天发现细胞死亡很多，剩余的细胞又不是细胞克隆的样子，而是以个别细胞存在。请有经验的虫友指点一下是怎么回事？谢谢
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性格决定命运
1楼 2009-10-08 20:45:36
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★
veronica5129(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+2,VIP+0): 10-8 21:36
不要太相信文献，有时候培养条件或者细胞来源的不一样，也会有差异的，你应该先摸一个剂量梯度，100~1000，也就是一个数量级里面摸
最低致死的那个才是ok的

然后不是细胞克隆的样子是什么意思呢？分开的？
有时候就这样的，因为有的细胞转染效率很高~~
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2楼2009-10-08 21:34:41
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kakicoco

铁虫 (小有名气)
★ ★
veronica5129(金币+1):谢谢参与
amisking(金币+1,VIP+0): 10-8 22:17
细胞克隆就是一个细胞长成的一堆细胞，一般情况下有这堆细胞长到50-100个之后就可以挑了
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3楼2009-10-08 22:06:47
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
其实，如果不长成克隆，我会先将细胞消化然后制成单细胞悬液到96孔板，使每个孔只有1个细胞，这样相当于也在单克隆化
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4楼2009-10-08 22:44:48
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zc450zc

金虫 (正式写手)
★
veronica5129(金币+1):谢谢参与
自己多做几次试验再试试吧 不要太相信文献了
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5楼2009-10-09 08:35:14
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veronica5129

铜虫 (初入文坛)
谢谢大家，主要是我不确定现在存活下来的细胞是否就是筛选得到阳性细胞，出现这种情况是没有筛选成功吗？细胞筛选浓度之前已确定为600ug/ml
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性格决定命运
6楼2009-10-09 11:56:36
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louyiceng

荣誉版主 (知名作家)

优秀版主
★
veronica5129(金币+1):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2009-10-08 21:34:41:
不要太相信文献，有时候培养条件或者细胞来源的不一样，也会有差异的，你应该先摸一个剂量梯度，100~1000，也就是一个数量级里面摸
最低致死的那个才是ok的

然后不是细胞克隆的样子是什么意思呢？分开的？
有 ...

谢谢
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7楼2010-03-18 07:59:51
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