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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒单切三条带，双切两条带
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wsmcc

金虫 (小有名气)

[交流] 质粒单切三条带，双切两条带

不知道为什么，最近做了个重组质粒，提取质粒后做了单切和双切，但是单切后竟然有三条带，一条与空质粒酶切前相同，一条带与空质粒单切大小相同，一条带很大。双切后，一条与空质粒单切后相同，一条也是很大，和单切后那条大的相同。但是重组的没经过酶切的质粒跑出来和空质粒一样，没有大的条带，没看出什么问题。为什么质粒酶切越切越大呢?
图片为：DL2000，空质粒，空质粒单切，空质粒单切，空质粒双切，空质粒，空质粒单切，空质粒单切，空质粒双切，DL15000，重组质粒，重组质粒单切，重组质粒单切，重组质粒双切，重组质粒，重组质粒单切，重组质粒单切，重组质粒双切。
希望我描述的足够清楚，请高人指教，谢谢！

[ Last edited by wsmcc on 2009-10-7 at 21:10 ]
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1楼 2009-10-07 21:05:41
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zhaolixia0814

金虫 (小有名气)
★
wsmcc(金币+1):谢谢参与
wsmcc(金币+1): 2010-03-12 10:07
你的重组质粒比空质粒大？差别多大？电泳上看感觉差不多，有一点可以肯定就是酶切不完全
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5楼2009-10-08 09:45:13
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695

木虫 (职业作家)
★
wsmcc(金币+1):谢谢参与
不要看带的多少，有些可能是酶切不充分模板剩下的，祝顺利
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3楼2009-10-08 00:48:18
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
wsmcc(金币+1):谢谢参与
==b
倒过来看电泳图真不方便~
我个人感觉是重组质粒有些没抽干净或者酶切不充分
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-10-08 09:22:32
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wsmcc

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhaolixia0814 at 2009-10-8 09:45:
你的重组质粒比空质粒大？差别多大？电泳上看感觉差不多，有一点可以肯定就是酶切不完全

重组质粒比空质粒大400bp，但是并没有看到切掉的目的基因。酶切应该是完全的，因为双切的质粒是没有3000bp的条带，而相同质粒量和相同的酶切时间的单切却有条带。
这幅图中的空质粒是别人给的现成的，我今天又自己做了转空质粒，提取质粒后单、双切结果仍是这样。我怀疑我的感受态不知道出什么问题了，虽然是氨苄抗性，阴性对照也无菌落长出，但是我觉得可能还是污染了某些东西。
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6楼2009-10-08 18:37:01
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