24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
汕头大学海洋科学接受调剂
查看: 529  |  回复: 4
当前主题已经存档。

695

木虫 (职业作家)

[交流] 关于表达载体的选择!

最近通过RACE找到了一个新的基因,从转录起始碱基开始后有很多个ATG,好像不能判读那个是起始密码子,如何通过实验验证呢?是否可以把从第一个 ATG开始后的序列都导入表达载体,然后看什么样的蛋白可以表达出来,不知这种策略是否正确。 如果这样的话,那种或者是那类表达载体应该使用呢?关于酶切位点选择应该怎么考虑呢?

[ Last edited by 695 on 2009-10-6 at 05:19 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangym1123

木虫 (小有名气)

★ ★ ★
695(金币+3,VIP+0): 10-6 15:24
您通过RACE获得了全长cNDA序列吗?如果是的话,可以通过DNATOOL 6.0对全长序列进行翻译,获得起始密码子的位置,也结合NCBI Blast分析起始密码子。将开放读码框连入表达载体酶切位点的选择需要考虑1.已知序列中没有的酶切位点,2.两个酶切位点最好有公用Buffer便于酶切。将序列连入表达载体再看有什么样的蛋白表达出来,这种方法是不可取的,因为你设计引物时要考虑如何正确表达出你的蛋白的。祝你好运!
2楼2009-10-06 08:54:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★
695(金币+2,VIP+0): 10-6 15:24
你可以看一下近缘物种的mRNA和protein各多长,然后从不同的ATG开始翻译,分别将不同的翻译结果进行NCBI blast,然后就可以判断了,尽管得到目标基因通常具有不同的ATG,但通常只有一个阅读框是完整的
3楼2009-10-06 09:29:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinlin

至尊木虫 (著名写手)


695(金币+1,VIP+0): 10-7 00:44
pET28a,pET30a,pET47b都可以
4楼2009-10-06 20:03:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主说的是不是这个意思:ATG GGC ATG ATG TCA ATG ATG ATG..........这些ATG都在同一个翻译读码框内,哪一个是真正的起始密码子呢?期待后来人解决
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2009-10-07 09:31:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 695 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 08工学 309分求调剂 +7 Yin DY 2026-04-08 7/350 2026-04-13 22:50 by pies112
[考研] 310求调剂 +15 666真好 2026-04-11 17/850 2026-04-13 22:27 by pies112
[考研] 化工学硕294分,求导师收留 +25 yzyzx 2026-04-12 28/1400 2026-04-13 22:16 by zhq0425
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+6 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 23/1150 2026-04-13 20:42 by biomen
[考研] 302求调剂 +10 易!? 2026-04-13 10/500 2026-04-13 19:04 by lbsjt
[考研] 材料考研调剂 +29 云木达达 2026-04-11 31/1550 2026-04-13 13:32 by lyh鲁老师
[考研] 生物学调剂,一志愿西南大学348,Top期刊一区二作、二区三作,三等奖学金三次 +5 candyyyi 2026-04-09 5/250 2026-04-13 09:02 by 可淡不可忘
[考研] 求调剂 +9 吃口冰激凌 2026-04-07 9/450 2026-04-13 08:46 by 紫曦紫棋
[考研] 295分求调剂 +13 ?要上岸? 2026-04-10 13/650 2026-04-12 15:37 by laoshidan
[考研] 药学305求调剂 +8 玛卡巴卡boom 2026-04-10 8/400 2026-04-12 00:07 by zhouwenxian
[考研] 求调剂 +18 MAX怅惘 2026-04-09 20/1000 2026-04-11 23:31 by zhen~
[考研] 311求调剂 +13 xyp想读书 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:41 by 猪会飞
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385,求调剂 +8 Ezra_Zhang 2026-04-09 8/400 2026-04-11 09:15 by 猪会飞
[考研] 中科院总分315求调剂 +8 lallalh 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:30 by dick_runner
[考研] 301求调剂 +5 149. 2026-04-10 5/250 2026-04-10 15:45 by 柴小白
[考研] 367求调剂 +10 hffQAQ 2026-04-09 10/500 2026-04-09 18:06 by lijunpoly
[考研] 353求调剂 +8 晴空万里air 2026-04-07 8/400 2026-04-09 00:18 by GouQ
[考研] 二次调剂求老师收留 +3 笑笑袁 2026-04-08 3/150 2026-04-08 23:50 by 醉在风里
[考研] 331求调剂 +5 张元一 2026-04-07 6/300 2026-04-07 22:13 by hemengdong
[考研] 一志愿西电085401求调剂 +4 sunw1306 2026-04-07 4/200 2026-04-07 16:40 by 啵啵啵0119
信息提示
请填处理意见