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695

木虫 (职业作家)

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[交流] 关于表达载体的选择！

最近通过RACE找到了一个新的基因，从转录起始碱基开始后有很多个ATG，好像不能判读那个是起始密码子，如何通过实验验证呢？是否可以把从第一个 ATG开始后的序列都导入表达载体，然后看什么样的蛋白可以表达出来，不知这种策略是否正确。如果这样的话，那种或者是那类表达载体应该使用呢？关于酶切位点选择应该怎么考虑呢？

[ Last edited by 695 on 2009-10-6 at 05:19 ]

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1楼 2009-10-06 05:09:05

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yangym1123

木虫 (小有名气)

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695(金币+3,VIP+0): 10-6 15:24

您通过RACE获得了全长cNDA序列吗？如果是的话，可以通过DNATOOL 6.0对全长序列进行翻译，获得起始密码子的位置，也结合NCBI Blast分析起始密码子。将开放读码框连入表达载体酶切位点的选择需要考虑1.已知序列中没有的酶切位点，2.两个酶切位点最好有公用Buffer便于酶切。将序列连入表达载体再看有什么样的蛋白表达出来，这种方法是不可取的，因为你设计引物时要考虑如何正确表达出你的蛋白的。祝你好运！