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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于表达载体的选择！
汕头大学海洋科学接受调剂
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695

木虫 (职业作家)

[交流] 关于表达载体的选择！

最近通过RACE找到了一个新的基因，从转录起始碱基开始后有很多个ATG，好像不能判读那个是起始密码子，如何通过实验验证呢？是否可以把从第一个 ATG开始后的序列都导入表达载体，然后看什么样的蛋白可以表达出来，不知这种策略是否正确。 如果这样的话，那种或者是那类表达载体应该使用呢？关于酶切位点选择应该怎么考虑呢？

[ Last edited by 695 on 2009-10-6 at 05:19 ]
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1楼 2009-10-06 05:09:05
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yangym1123

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
695(金币+3,VIP+0): 10-6 15:24
您通过RACE获得了全长cNDA序列吗？如果是的话，可以通过DNATOOL 6.0对全长序列进行翻译，获得起始密码子的位置，也结合NCBI Blast分析起始密码子。将开放读码框连入表达载体酶切位点的选择需要考虑1.已知序列中没有的酶切位点，2.两个酶切位点最好有公用Buffer便于酶切。将序列连入表达载体再看有什么样的蛋白表达出来，这种方法是不可取的，因为你设计引物时要考虑如何正确表达出你的蛋白的。祝你好运！
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2楼2009-10-06 08:54:07
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★
695(金币+2,VIP+0): 10-6 15:24
你可以看一下近缘物种的mRNA和protein各多长，然后从不同的ATG开始翻译，分别将不同的翻译结果进行NCBI blast，然后就可以判断了，尽管得到目标基因通常具有不同的ATG，但通常只有一个阅读框是完整的
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3楼2009-10-06 09:29:12
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jinlin

至尊木虫 (著名写手)
★
695(金币+1,VIP+0): 10-7 00:44
pET28a,pET30a,pET47b都可以
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4楼2009-10-06 20:03:03
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主说的是不是这个意思：ATG GGC ATG ATG TCA ATG ATG ATG..........这些ATG都在同一个翻译读码框内，哪一个是真正的起始密码子呢？期待后来人解决
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2009-10-07 09:31:23
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