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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 我能做SMART RACE 么
汕头大学海洋科学接受调剂
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gogagaover

新虫 (初入文坛)

[交流] 我能做SMART RACE 么

各位专家，

我的RNA照片在此，有同学说我的RNA讲解了，因为，28S不亮，5S太亮。

不能做SMART RACE 么？
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1楼 2009-10-02 11:20:15
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
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楼主要想省钱，可以按照试剂盒的说明，自己合成引物订购相关的酶，smartRACE试剂盒自己订购酶花的钱可能会省2/3，我没细算过，但是我们这里好多人都是自己定酶回来然后按试剂盒的操作，但是酶必须是一些大公司比如invitrogen或者clontech的，smartRACE的原理就是利用了MMLV的末端转移酶活性，假如你定的酶没有此活性，那就歇菜了，来合成5‘和3’第一链，其次PCR扩增时引物要设计高tm值的引物使用热启动酶进行PCR，因其原理的限制有时得不到全长。
相比之下新RACE（例如invitrogen）就很强，但也很麻烦，不过效率高一点。

至于能不能做，在于你自己的机遇还有你们实验室的条件，至于楼上说的2：1，有些物种得到的RNA28：18就不是2：1，所以也不要太迷信。
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5楼2009-10-03 16:16:17
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
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amisking(金币+5,VIP+0): 10-2 17:55
从你电泳图可以看出RNA有部分的降解，做RACE还是可以试试，如果降解的RNA中你的目的RNA没有降解就会得到好的结果，反之则不行，但RACE还是可以试试的，但你要明白clontech的技术有时不能得到全长，
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2楼2009-10-02 17:21:46
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bambino

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
做那东西，有什么用？？分子的东西就是骗学生的
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3楼2009-10-03 00:48:29
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mascotte

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般来说，28S：18S的比列为2：1算是不错的。楼主这样的RNA降解了不少，最好不要做RACE了，当然样品宝贵的话另当别论。SMART RACE可以将细胞所有的mRNA扩增出来做库，所以RNA的质量是一定要有保证的。而且国内的smart RACE试剂盒通常在10次4000左右价格范围内，每次SMART RACE实验试剂盒就要花费 400-500RMB，如果有这么两三次不成功的话是会很头疼的，所以每步都要严格质量控制。
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4楼2009-10-03 06:21:50
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