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gogagaover

新虫 (初入文坛)

[交流] 我能做SMART RACE 么

各位专家,

我的RNA照片在此,有同学说我的RNA讲解了,因为,28S不亮,5S太亮。

不能做SMART RACE 么?
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gastrodia

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
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amisking(金币+5,VIP+0): 10-2 17:55
从你电泳图可以看出RNA有部分的降解,做RACE还是可以试试,如果降解的RNA中你的目的RNA没有降解就会得到好的结果,反之则不行,但RACE还是可以试试的,但你要明白clontech的技术有时不能得到全长,
2楼2009-10-02 17:21:46
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bambino

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
做那东西,有什么用??分子的东西就是骗学生的
3楼2009-10-03 00:48:29
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mascotte

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般来说,28S:18S的比列为2:1算是不错的。楼主这样的RNA降解了不少,最好不要做RACE了,当然样品宝贵的话另当别论。SMART RACE可以将细胞所有的mRNA扩增出来做库,所以RNA的质量是一定要有保证的。而且国内的smart RACE试剂盒通常在10次4000左右价格范围内,每次SMART RACE实验试剂盒就要花费 400-500RMB,如果有这么两三次不成功的话是会很头疼的,所以每步都要严格质量控制。
4楼2009-10-03 06:21:50
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gastrodia

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主要想省钱,可以按照试剂盒的说明,自己合成引物订购相关的酶,smartRACE试剂盒自己订购酶花的钱可能会省2/3,我没细算过,但是我们这里好多人都是自己定酶回来然后按试剂盒的操作,但是酶必须是一些大公司比如invitrogen或者clontech的,smartRACE的原理就是利用了MMLV的末端转移酶活性,假如你定的酶没有此活性,那就歇菜了,来合成5‘和3’第一链,其次PCR扩增时引物要设计高tm值的引物使用热启动酶进行PCR,因其原理的限制有时得不到全长。
相比之下新RACE(例如invitrogen)就很强,但也很麻烦,不过效率高一点。

至于能不能做,在于你自己的机遇还有你们实验室的条件,至于楼上说的2:1,有些物种得到的RNA28:18就不是2:1,所以也不要太迷信。
5楼2009-10-03 16:16:17
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gogagaover

新虫 (初入文坛)

感谢各位专家。

我已经买了SMART RACE 试剂盒,老板一看我的RNA, 又听其他学生说不能做,因此不敢让我做了。

可是我自己觉得挺好啊
6楼2009-10-05 12:18:21
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