应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » sma1酶切
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 842  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

mzqpony

金虫 (正式写手)

[交流] sma1酶切

刚开始做酶切连接，不了解，请问用sma1单酶切产生的平末端能否可以直接与pfu高保真酶PCR回收后的产物直接连接，酶切时间一般多长，T4连接需要多长时间，Sma1酶切载体后用不用去磷酸化？
谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-10-02 09:48:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greatwall8596

★
mzqpony(金币+1,VIP+0):谢谢 10-2 23:45
PCR产物也用你切载体的酶（Sma1）处理，这样连上去就是环形的了呀
我一般不纯化，纯化会损失
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-10-02 12:43:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
mzqpony(金币+2,VIP+0):谢谢 10-2 10:18
amisking(金币+2,VIP+0): 10-2 10:19
单切一般建议去磷酸化
平端可以和平端直接连
Fermentas、NEB的T4按照说明书的推荐条件连接即可
如果不放心可以4度过夜
赞一下(11人) 回复此楼
2楼2009-10-02 10:06:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mzqpony

金虫 (正式写手)
单酶切连接后怎让其环化？酶切产物还用纯化吗？
赞一下 回复此楼
3楼2009-10-02 10:18:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
350784478(金币+2,VIP+0):感谢参与解答。 10-2 15:04
mzqpony(金币+2,VIP+0):谢谢 10-2 23:45
楼主，告诉你我得秘方吧，我做这个做过很多次了。
PFU酶的产物我是直接拿来做连接的。质粒载体先用Sma1酶切半个小时以上（不同的载体时间可以适当延长），然后再将该酶切产物、平末端片段、10*Y BUFFER、水、PEG4000、ATP、连接酶配成连接反应体系，当然还要再这里补一些Sma1酶，边连边切，效果不错。我用的载体是PGH载体，该载体连接效率高。
赞一下(10人) 回复此楼
5楼2009-10-02 14:07:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂推荐 +5 小聂爱学习 2026-04-14 5/250 2026-04-15 09:01 by blunt110
[考研] 药学305求调剂 +6 玛卡巴卡boom 2026-04-11 6/300 2026-04-14 19:48 by zhouxiaoyu
[考研] 366求调剂 +11 不知名的小卅 2026-04-11 11/550 2026-04-14 15:50 by zs92450
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+6 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 28/1400 2026-04-14 15:44 by zs92450
[考研] 0856专硕求调剂 希望是a区院校 +24 好好休息好不好 2026-04-09 27/1350 2026-04-13 22:22 by pies112
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +8 慕绝cc 2026-04-09 8/400 2026-04-13 14:08 by 张zhihao
[考研] 0854调剂 +10 长弓傲 2026-04-11 11/550 2026-04-13 10:38 by wp06
[考研] 本科南方医科大学 一志愿985 药学学硕284分 求调剂 +5 弱水听文 2026-04-09 5/250 2026-04-12 13:16 by shengxi123
[考研] 307求调剂 +10 tzq94092 2026-04-10 10/500 2026-04-12 08:18 by wise999
[考研] 化工调剂求导师收留！一志愿失利，踏实肯干，有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 277 数一104，学硕，求调剂 +21 瓶子PZ 2026-04-09 23/1150 2026-04-11 23:12 by labixiaoqiao
[考研] 药学专硕调剂 +8 ? 一路生?花? 2026-04-10 10/500 2026-04-11 21:21 by zhouxiaoyu
[考研] 352 求调剂 +6 yzion 2026-04-11 8/400 2026-04-11 16:24 by 明月此时有
[考研] 求调剂，一志愿大连理工大学354分 +5 雨声余生 2026-04-11 6/300 2026-04-11 16:12 by 雨声余生
[考研] 085410-273求调剂 +6 X1999 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:32 by Delta2012
[考研] 337求调剂 +4 研s. 2026-04-10 4/200 2026-04-11 08:57 by zhq0425
[考研] 284求调剂 +9 让我上岸吧阿西 2026-04-09 11/550 2026-04-10 19:18 by 靖jing
[考研] 调剂申请086000一志愿西北农林科技大学生物与医药320分-本科齐鲁工业大学 +3 美美女士 2026-04-09 3/150 2026-04-10 10:31 by liuhuiying09
[考研] 本科西工大 0856 324求调剂 +10 wysyjs25 2026-04-09 11/550 2026-04-10 08:37 by 5268321
[考研] 314求调剂 +14 weltZeng 2026-04-09 14/700 2026-04-09 23:14 by wolf97
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭