应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » sma1酶切
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 838  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

mzqpony

金虫 (正式写手)

[交流] sma1酶切

刚开始做酶切连接，不了解，请问用sma1单酶切产生的平末端能否可以直接与pfu高保真酶PCR回收后的产物直接连接，酶切时间一般多长，T4连接需要多长时间，Sma1酶切载体后用不用去磷酸化？
谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-10-02 09:48:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
mzqpony(金币+2,VIP+0):谢谢 10-2 10:18
amisking(金币+2,VIP+0): 10-2 10:19
单切一般建议去磷酸化
平端可以和平端直接连
Fermentas、NEB的T4按照说明书的推荐条件连接即可
如果不放心可以4度过夜
赞一下(11人) 回复此楼
2楼2009-10-02 10:06:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mzqpony

金虫 (正式写手)
单酶切连接后怎让其环化？酶切产物还用纯化吗？
赞一下 回复此楼
3楼2009-10-02 10:18:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

greatwall8596

★
mzqpony(金币+1,VIP+0):谢谢 10-2 23:45
PCR产物也用你切载体的酶（Sma1）处理，这样连上去就是环形的了呀
我一般不纯化，纯化会损失
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-10-02 12:43:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spiderboy

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
350784478(金币+2,VIP+0):感谢参与解答。 10-2 15:04
mzqpony(金币+2,VIP+0):谢谢 10-2 23:45
楼主，告诉你我得秘方吧，我做这个做过很多次了。
PFU酶的产物我是直接拿来做连接的。质粒载体先用Sma1酶切半个小时以上（不同的载体时间可以适当延长），然后再将该酶切产物、平末端片段、10*Y BUFFER、水、PEG4000、ATP、连接酶配成连接反应体系，当然还要再这里补一些Sma1酶，边连边切，效果不错。我用的载体是PGH载体，该载体连接效率高。
赞一下(10人) 回复此楼
5楼2009-10-02 14:07:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mzqpony 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +4 长弓傲 2026-04-13 4/200 2026-04-13 18:27 by zhouyuwinner
[考研] 290求调剂 +15 luoziheng 2026-04-10 15/750 2026-04-13 16:31 by 张zhihao
[考研] 材料相关专业344求调剂双非工科学校或课题组 +15 hualkop 2026-04-12 16/800 2026-04-13 16:29 by 张zhihao
[考研] 2026硕士调剂_能动_河南农业大学 +3 河南农业大学-能 2026-04-12 3/150 2026-04-13 12:44 by 木鱼.
[考研] 求调剂，985材料与化工348分 +9 涵竹刘 2026-04-11 13/650 2026-04-12 22:40 by 涵竹刘
[考研] 一志愿厦大0856，306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-08 15/750 2026-04-11 20:28 by dongdian1
[考研] 085410 273分调剂 +4 X1999 2026-04-09 4/200 2026-04-11 13:05 by pies112
[考研] 求调剂 +6 archer.. 2026-04-09 8/400 2026-04-11 10:55 by zhq0425
[考研] 282，求调剂 +12 jggshjkkm 2026-04-09 14/700 2026-04-11 09:39 by 猪会飞
[考研] 0854调剂 +4 长弓傲 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:18 by 猪会飞
[考研] 265求调剂 +12 风说她早忘了 2026-04-10 13/650 2026-04-10 18:56 by chemisry
[考研] 一志愿中科大070300化学，314分求调剂 +12 wakeluofu 2026-04-09 12/600 2026-04-10 09:57 by liuhuiying09
[考研] 0703化学求调剂 +21 不知名的小卅 2026-04-08 21/1050 2026-04-09 18:55 by l_paradox
[考研] 考研调剂 +13 冰冰，，， 2026-04-07 13/650 2026-04-09 17:01 by Lilly_Li
[考研] 085801 总分275 本科新能源 求调剂 +8 bradoner 2026-04-08 9/450 2026-04-09 13:43 by only周
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +10 努力奋斗112 2026-04-07 10/500 2026-04-08 15:01 by screening
[考研] 287求调剂 +6 Fnhc 2026-04-07 6/300 2026-04-08 10:05 by xingguangj
[考研] 323求调剂 +3 林zlu 2026-04-07 4/200 2026-04-07 23:21 by lbsjt
[考研] 344求调剂 +11 魏子per 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:01 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭