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测序一直错误 已有5人参与
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最近在把一段400bp左右的片段连接到载体上，用的是无缝克隆连接的，第一次连接完去测序，六个样品，每个都出现碱基缺失或者碱基错误，还都发生在中间部位，有的在同源臂连接部分，有的在序列中间，（错误都不在测序前后100bp内），换了一家无缝克隆的试剂盒（诺唯赞的）重新做了一次，最后取PCR产物去测序，结果又在不同的关键部位有碱基错误，每一个测序样品都是。实验做PCR全程用的高保真酶，现在不知道怎么办了以前做无缝克隆从来没有出现过这样的情况啊有没有大佬给指导一下啊 发自小木虫Android客户端 |
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shuaibia6
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3楼2023-05-26 08:48:38
yudaoqian88
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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1，你可以找小伙伴顺带帮你做一遍，看结果是否一样。2，多个样品出现序列与参考序列不一致，考虑是不是序列本身就是这样的。可以把两次的测序结果进行比对，看错误匹配处碱基是否一致，如果是一样的，那表明你所用材料里的目标序列就是这样的。 发自小木虫Android客户端 |
2楼2023-05-25 22:25:58
4楼2023-05-26 11:13:05
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5楼2023-05-26 11:14:09
