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转膜时大分子量和小分子量蛋白，该如何选择膜孔径? 已有1人参与
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对所有的蛋白，我们推荐用 Nitrocellulose Sandwiches #12369（0.2 μm）的杂交膜去转膜，尤其是分子量低于 30 KD 的蛋白，建议使用较高浓度（12-15%）的蛋白分离胶并缩短转膜的时间，建议在 1 小时以内。 大分子量蛋白（> 150 kDa）推荐使用 tris-acetate SDS-PAGE 凝胶系统，而不是传统的（tris-glycine），以及 5% 的甲醇。因为 tris-acetate 凝胶是在一个中性 pH 的条件下，所以分辨率比较高而且迁移的也更加精准。 低浓度的甲醇可以使转膜的效率更高（25 mM Tris base，0.2 M glycine，5% methanol）。长时间的转膜（3 小时，70 伏）也是很有帮助的。对 mTOR 来说长时间的转膜可能不一定有效，因为 mTOR 是个高表达蛋白，一般来说用常规的 protocol 也可以得到比较好的实验结果，但是对于 BRCA1，ATM，ATR 等这些大分子量蛋白还是十分有帮助的。 作者：毕合生物 公众号：毕合生物 毕合生物提供服务内容：分子生物学、免疫, 重组蛋白及ELISA相关、活性小分子化合物、高端化学、材料化学、细胞资源库与培养相关、生命科学、天然产物 |
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