| 查看: 1031 | 回复: 0 | |||
[交流]
一文了解DNA提取常见问题
|
|
DNA提取，是科研实验室常用的实验步骤，提取DNA的质量直接影响后续的检测工作，今天小助手将常见的问题进行了一个总结，供大家参考。 一、A260/280比值较低？或者A260/280比值较高？ 用水作为洗脱液比较偏低，或者蛋白质残留，但如果操作过程中使用了苯酚，则更可能是苯酚残留。而比较高可能是大量RNA残留，没有使用RNaseA，或RNaseA活性下降。 A260值提示的含量与电泳检测时提示的含量有可见的误差则为苯酚残留。 二、提取的细菌基因组DNA有降解，为什么？ 确认选用的培养菌体是否新鲜，如果菌体需要保存时，请于-80℃保存。 起始菌液量过多，导致菌液裂解不充分，部分DNA降解。 菌体本身富含DNA酶活性，加入Digestion solution后再加20uL0.5M EDTA溶液来抑制内源性核酸酶。 三、提取的基因组DNA生物活性差，为什么？ 提取的基因组DNA中盐分浓度过高，请严格按照说明书操作。 提取的基因组DNA中含有乙醇。离心的速度和时间应该严格遵循说明书要求进行。 四、为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊醇？ 在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。一般采用氯仿与异戊醇为24:1之比。也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25:24:1（不必先配制，可在临用前把一份酚加一份24:1的氯仿与异戊醇即成），同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有137人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
50