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一文了解DNA提取常见问题
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DNA提取，是科研实验室常用的实验步骤，提取DNA的质量直接影响后续的检测工作，今天小助手将常见的问题进行了一个总结，供大家参考。 一、A260/280比值较低？或者A260/280比值较高？ 用水作为洗脱液比较偏低，或者蛋白质残留，但如果操作过程中使用了苯酚，则更可能是苯酚残留。而比较高可能是大量RNA残留，没有使用RNaseA，或RNaseA活性下降。 A260值提示的含量与电泳检测时提示的含量有可见的误差则为苯酚残留。 二、提取的细菌基因组DNA有降解，为什么？ 确认选用的培养菌体是否新鲜，如果菌体需要保存时，请于-80℃保存。 起始菌液量过多，导致菌液裂解不充分，部分DNA降解。 菌体本身富含DNA酶活性，加入Digestion solution后再加20uL0.5M EDTA溶液来抑制内源性核酸酶。 三、提取的基因组DNA生物活性差，为什么？ 提取的基因组DNA中盐分浓度过高，请严格按照说明书操作。 提取的基因组DNA中含有乙醇。离心的速度和时间应该严格遵循说明书要求进行。 四、为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊醇？ 在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气泡，气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过程中的泡沫产生。一般采用氯仿与异戊醇为24:1之比。也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25:24:1（不必先配制，可在临用前把一份酚加一份24:1的氯仿与异戊醇即成），同时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定。 |
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