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陈之言

新虫 (初入文坛)

[交流] 请问为什么多糖过DEAE-52不出峰,上样量250mg,流速为1ml/min,每管接6ml

请问为什么多糖过DEAE-52不出峰,上样量250mg,流速为1ml/min,每管接6ml

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aoaolalxc

新虫 (初入文坛)


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下面是几个猜想
1、多糖是否完全溶于水,DEAE-52 Cellulose分离纯化多糖的原理是酸性多糖倍吸附至阴离子交换柱上,经水、盐溶液洗涤后,因为这些溶剂与DEAE-52 Cellulos结合更紧密,会把多糖替换下来,多糖就洗脱下来了,如果不是溶液的话,离子交换的效果不好;
2、多糖在上样的过程中,就应该用离心管盛接,因为中性多糖组分无法被吸附,因为没有电荷啊,无法完成与DEAE-52 Cellulos的离子交换,如果你的糖是中性糖,上样的时候就直接流下去了;
3、 如果你的糖是酸性糖,是否盐溶液的浓度足够大,以至于把酸性多糖洗下来。比如文献做到1mg/mL的NaCl,我们可以再用1.2mg/mL的NaCl和1.4mg/mL的NaCl再洗涤一下;
4、洗涤液的体积是否足够,我看的文献是每个浓度梯度50mL或者100mL,但是我的样品必须用超纯水、0.1 mol/L NaCl、0.2 mol/L NaCl、0.4 mol/L NaCl、0.8 mol/L NaCl、1.0 mol/L NaCl和1.2 mol/L NaCl溶液各200 mL洗涤、
5、柱子的高度是否合理,如果柱子过高或者体积过大,会导致样品很久很久才能遍布整个柱子填料中,此时已经需要很多溶剂把样品带到柱子填料中了,所以还没有多糖被洗脱下来;
6、浓度梯度最好多设几个,然后把每个梯度下的洗脱液体积增大些,就能看出来你的多糖主要分布在那个浓度梯度的洗脱液中了;
2楼2023-05-19 14:07:14
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没有定义

新虫 (初入文坛)


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2楼: Originally posted by aoaolalxc at 2023-05-19 14:07:14
下面是几个猜想
1、多糖是否完全溶于水,DEAE-52 Cellulose分离纯化多糖的原理是酸性多糖倍吸附至阴离子交换柱上,经水、盐溶液洗涤后,因为这些溶剂与DEAE-52 Cellulos结合更紧密,会把多糖替换下来,多糖就洗脱下 ...

请问DEAE-52用之前需要碱酸碱预处理吗,我买的那个填料说明书说直接用缓冲液溶胀就能用了

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3楼2023-06-28 12:53:48
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Jinyoh

新虫 (初入文坛)


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3楼: Originally posted by 没有定义 at 2023-06-28 12:53:48
请问DEAE-52用之前需要碱酸碱预处理吗,我买的那个填料说明书说直接用缓冲液溶胀就能用了
...

按照说明书就好了吧,我看的很多文献处理方法是酸碱酸,也有直接溶胀48小时,低温储存就行
4楼2023-08-16 17:34:17
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