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请问为什么多糖过DEAE-52不出峰，上样量250mg，流速为1ml/min，每管接6ml
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请问为什么多糖过DEAE-52不出峰，上样量250mg，流速为1ml/min，每管接6ml 发自小木虫Android客户端 |
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Jinyoh
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4楼2023-08-16 17:34:17
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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下面是几个猜想 1、多糖是否完全溶于水，DEAE-52 Cellulose分离纯化多糖的原理是酸性多糖倍吸附至阴离子交换柱上，经水、盐溶液洗涤后，因为这些溶剂与DEAE-52 Cellulos结合更紧密，会把多糖替换下来，多糖就洗脱下来了，如果不是溶液的话，离子交换的效果不好； 2、多糖在上样的过程中，就应该用离心管盛接，因为中性多糖组分无法被吸附，因为没有电荷啊，无法完成与DEAE-52 Cellulos的离子交换，如果你的糖是中性糖，上样的时候就直接流下去了； 3、 如果你的糖是酸性糖，是否盐溶液的浓度足够大，以至于把酸性多糖洗下来。比如文献做到1mg/mL的NaCl，我们可以再用1.2mg/mL的NaCl和1.4mg/mL的NaCl再洗涤一下； 4、洗涤液的体积是否足够，我看的文献是每个浓度梯度50mL或者100mL，但是我的样品必须用超纯水、0.1 mol/L NaCl、0.2 mol/L NaCl、0.4 mol/L NaCl、0.8 mol/L NaCl、1.0 mol/L NaCl和1.2 mol/L NaCl溶液各200 mL洗涤、 5、柱子的高度是否合理，如果柱子过高或者体积过大，会导致样品很久很久才能遍布整个柱子填料中，此时已经需要很多溶剂把样品带到柱子填料中了，所以还没有多糖被洗脱下来； 6、浓度梯度最好多设几个，然后把每个梯度下的洗脱液体积增大些，就能看出来你的多糖主要分布在那个浓度梯度的洗脱液中了； |
2楼2023-05-19 14:07:14
3楼2023-06-28 12:53:48
