应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 沙门氏菌基因敲除求大佬指导！
51/1返回列表
查看: 592  |  回复: 11
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

GracyGao

新虫 (初入文坛)
已领完
沙门氏菌基因敲除求大佬指导！
领取红包 (小木虫手机app专属红包)

扫一扫，下载小木虫客户端

各位大佬，我用的是crispr/cas9系统，想敲除肠炎野生株1000bp左右的基因，cas9一个质粒，sgrna和上下游同源臂一个质粒。cas9和重组sgrna质粒转进野生菌之后都pcr验证过。
诱导的时候菌摇到OD0.4-0.6，加了100mM的IPTG诱导T5启动子进行同源重组修复1h，加1M的L-阿拉伯糖诱导cas9蛋白切割基因组，最后涂抗性和阿拉伯糖平板，菌落长出来之后pcr验证。
pcr验证之后没有缺失掉，请问各位大佬可能会有什么问题导致没有敲除掉？
请问T5启动子可以用于沙门氏菌吗？我这两个质粒之前只在大肠杆菌有人做过。
拜托各位大佬指导一下

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼2023-05-12 11:52:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biosci

捐助贵宾 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
t5启动子是可以用于沙门菌的，你这个目的基因没敲除掉，有没有排除是必需基因啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
12楼2023-05-12 20:00:27
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
简单回复
nono20098楼
2023-05-12 12:13   回复  
GracyGao(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
jln09187楼
2023-05-12 12:10   回复  
GracyGao(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
tzynew4楼
2023-05-12 11:54   回复  
GracyGao(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
XG-WUST9楼
2023-05-12 12:13   回复  
GracyGao(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
Roy_shadow10楼
2023-05-12 12:37   回复  
GracyGao(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
憨豆豆zhy11楼
2023-05-12 12:46   回复  
GracyGao(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
ATLANTS6楼
2023-05-12 11:59   回复  
GracyGao(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
ffplant3楼
2023-05-12 11:54   回复  
GracyGao(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫IOS客户端
恒意赛teh2楼
2023-05-12 11:52   回复  
GracyGao(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
卿卿卿fbj5楼
2023-05-12 11:58   回复  
GracyGao(金币+1): 谢谢参与
已获得1个金币 发自小木虫Android客户端
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复(可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭