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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 沙门氏菌基因敲除求大佬指导！
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GracyGao

新虫 (初入文坛)
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沙门氏菌基因敲除求大佬指导！
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各位大佬，我用的是crispr/cas9系统，想敲除肠炎野生株1000bp左右的基因，cas9一个质粒，sgrna和上下游同源臂一个质粒。cas9和重组sgrna质粒转进野生菌之后都pcr验证过。
诱导的时候菌摇到OD0.4-0.6，加了100mM的IPTG诱导T5启动子进行同源重组修复1h，加1M的L-阿拉伯糖诱导cas9蛋白切割基因组，最后涂抗性和阿拉伯糖平板，菌落长出来之后pcr验证。
pcr验证之后没有缺失掉，请问各位大佬可能会有什么问题导致没有敲除掉？
请问T5启动子可以用于沙门氏菌吗？我这两个质粒之前只在大肠杆菌有人做过。
拜托各位大佬指导一下

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1楼2023-05-12 11:52:11
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biosci

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t5启动子是可以用于沙门菌的，你这个目的基因没敲除掉，有没有排除是必需基因啊

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12楼2023-05-12 20:00:27
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恒意赛teh2楼
2023-05-12 11:52   回复  
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ffplant3楼
2023-05-12 11:54   回复  
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tzynew4楼
2023-05-12 11:54   回复  
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卿卿卿fbj5楼
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ATLANTS6楼
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jln09187楼
2023-05-12 12:10   回复  
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nono20098楼
2023-05-12 12:13   回复  
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XG-WUST9楼
2023-05-12 12:13   回复  
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Roy_shadow10楼
2023-05-12 12:37   回复  
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憨豆豆zhy11楼
2023-05-12 12:46   回复  
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