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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 生物效应评价 » 【求助】【求助】关于蛋白定量-------一个令本人十分困扰的问题
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yqhao

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助】【求助】关于蛋白定量-------一个令本人十分困扰的问题

【求助】关于蛋白定量-------一个令本人十分困扰的问题
请教高人：通过牛血清白蛋白标准曲线，定量测得相同体积两管细胞裂解液的蛋白总量相同，是否可以推断这两管裂解液所裂解的细胞数量相同呢？换句话说，即使用不同的干扰因素处理后，并培养一段时间，相同数量的同种细胞，其所含蛋白总量仍然相同吗？
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1楼 2009-09-29 21:07:53
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ylcui

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
薰衣草儿(金币+1,VIP+0):那样的话，做个蛋白电泳就行了，虫子说的方法是测DNA或活细胞量或特定细胞之类，LZ还是想测总蛋白吧~ 10-14 09:21
yqhao(金币+10,VIP+0):很专业 11-1 22:37
一般做蛋白分析时预先做蛋白定量，目的是看相同量的总蛋白中感兴趣的蛋白的表达量，而不是做细胞计数的目的。
如果做细胞计数，可以用测定DNA含量的方法（如结晶紫染色、赫希斯特33258染料荧光染色定量、BrdU掺入），或者是某些酶活性的方法（MTT、钙黄绿素或刃天青荧光染色定量）。
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6楼2009-10-14 00:03:03
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薰衣草儿

荣誉版主 (知名作家)

♡花语の恋♡

优秀版主
★ ★ ★ ★ ★ ★
yusen_1982(金币+1,VIP+0):赞一个 10-12 11:54
yqhao(金币+5,VIP+0):感谢支持 11-1 22:38
偶来说一下吧：细胞总蛋白定量，一般采用考马斯亮蓝法，采用的是标准BCA，这个有现成的试剂盒卖，所以LZ就不用费心了~
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　　　　　．*　☆．☆°　*.　☆　☆‘‘　☆。　　　　　　☆☆。　　*°　‘‘☆　☆°*‘‘°'☆
3楼2009-10-12 10:12:05
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travelerchem

至尊木虫 (知名作家)
薰衣草儿(金币+0,VIP+0):他是想测蛋白含量变化，不是细胞数吧~ 10-12 10:51
我觉得：相同数量的同种细胞，其所含蛋白总量未必相同。为什么要通过蛋白测定细胞数呢，直接用计数板不可？
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4楼2009-10-12 10:43:41
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xuah

木虫 (正式写手)

不完全对等

★ ★ ★ ★ ★ ★
zhangwj(金币+1,VIP+0):thanks 10-13 15:39
yqhao(金币+5,VIP+0):可能是我表达不清，我想做碱性磷酸酶活性检测，但有人建议必须先做蛋白定量，我不知为什么，才发帖 11-1 22:36
无论是利用考马斯亮蓝还是BCA法，都是测定蛋白中还原性物质的含量，而蛋白中的还原性氨基酸含量也不尽相同，更不用说细胞中的蛋白含量了。我认为细胞计数法比较准一点，或者直接用MTT法。
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5楼2009-10-13 13:04:50
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