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新虫 (初入文坛)

[交流] 重叠延伸PCR 已有2人参与

大佬们，做重叠延伸PCR时，两个待连接的片段互为引物搭建起来成为一个长片段这个过程中，两个片段的添加量有要求吗，大概要添加多少ng啊？

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1楼 2023-05-05 23:46:23

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新虫 (初入文坛)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

2楼: Originally posted by KM石头 at 2023-05-06 15:29:36
按照摩尔比1：1混合，添加量，就按照正常PCR反应添加量添加；不加引物进行PCR循环5次，再添加引物正常PCR

请问，我好几个片段连接，理想结果是三千五，最后跑出的条带就三四百，这是为啥啊

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3楼2023-06-05 14:17:16

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金虫 (正式写手)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

按照摩尔比1：1混合，添加量，就按照正常PCR反应添加量添加；不加引物进行PCR循环5次，再添加引物正常PCR

2楼2023-05-06 15:29:36

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新虫 (初入文坛)

引用回帖:

3楼: Originally posted by 哒哒哒嘎嘣 at 2023-06-05 14:17:16
请问，我好几个片段连接，理想结果是三千五，最后跑出的条带就三四百，这是为啥啊
...

如果是没连上，不应该是出现这几个片段各自的长度嘛，为啥子是那么短

发自小木虫IOS客户端

4楼2023-06-05 14:18:24

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