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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助】cDNA一直反转录不成功。

我用的是上海生工cDNA MMLV cDNA first cDNA strand, 反转录一直不成功。
我导师给我的意见是RNA出了问题,但最近RNA一直失败,有什么更好的办法提取RNA吗?或者有什么更好的试剂盒反转录的?

大家觉得需要买太贵的试剂盒或者反转录酶么???我这里实验室的有一个同学她是用 Invitrogen Trizol抽提试剂,她做出来了。
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lzhwin

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主最好能写明你提的样品是什么。这样大家提建议会更有针对性。
一般提RNA trizol是通用的方法,但是要注意的是现在invitrogen的trizol有很多是假的,太贪图便宜可能会吃亏的。

另外就是如果样品需要研磨一定要保证研磨过程样品中始终处于液氮的冰冻状态,如果在加trizol前样品不小心化了就会很麻烦。要严格按说明书的用量加,不能太节约
7楼2009-09-28 19:11:41
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zdf68

新虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
Trizol Trizol抽提试剂
2楼2009-09-28 11:15:37
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wlwhappy

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
反转录酶挺贵的,我们组大部分都是自己定量的。
3楼2009-09-28 11:18:18
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
反转录很大程度上取决于你所提的RNA质量的好坏,纯度和浓度,试剂盒提比较干净,trizol提,仔细操作,特别需要注意RNA容易降解哦
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2009-09-28 11:18:47
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