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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助】cDNA一直反转录不成功。

我用的是上海生工cDNA MMLV cDNA first cDNA strand, 反转录一直不成功。
我导师给我的意见是RNA出了问题,但最近RNA一直失败,有什么更好的办法提取RNA吗?或者有什么更好的试剂盒反转录的?

大家觉得需要买太贵的试剂盒或者反转录酶么???我这里实验室的有一个同学她是用 Invitrogen Trizol抽提试剂,她做出来了。
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swallow192

银虫 (小有名气)


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我觉得可以用异硫氰酸胍提RNA试试,我们用这种方法提取的RNA非常好,反转录效率也非常高。反转录可以不用试剂盒的,我们都是自己用oligoD(t)+dNTP+反转录酶自己做得。反转录酶我们用的是Invitrogen的。我觉得你作不出来可能有两个原因,1.RNA不纯,抑制反转录。2。那个反转录试剂盒里的东西有坏掉的。
6楼2009-09-28 16:30:23
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zdf68

新虫 (正式写手)


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Trizol Trizol抽提试剂
2楼2009-09-28 11:15:37
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wlwhappy

银虫 (正式写手)


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反转录酶挺贵的,我们组大部分都是自己定量的。
3楼2009-09-28 11:18:18
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
反转录很大程度上取决于你所提的RNA质量的好坏,纯度和浓度,试剂盒提比较干净,trizol提,仔细操作,特别需要注意RNA容易降解哦
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2009-09-28 11:18:47
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