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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】cDNA一直反转录不成功。
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erictan2046

铜虫 (正式写手)

[交流] 【求助】cDNA一直反转录不成功。

我用的是上海生工cDNA MMLV cDNA first cDNA strand, 反转录一直不成功。
我导师给我的意见是RNA出了问题，但最近RNA一直失败，有什么更好的办法提取RNA吗？或者有什么更好的试剂盒反转录的？

大家觉得需要买太贵的试剂盒或者反转录酶么？？？我这里实验室的有一个同学她是用 Invitrogen Trizol抽提试剂，她做出来了。
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1楼 2009-09-28 10:49:34
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swallow192

银虫 (小有名气)
★
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我觉得可以用异硫氰酸胍提RNA试试，我们用这种方法提取的RNA非常好，反转录效率也非常高。反转录可以不用试剂盒的，我们都是自己用oligoD（t）＋dNTP＋反转录酶自己做得。反转录酶我们用的是Invitrogen的。我觉得你作不出来可能有两个原因，1.RNA不纯，抑制反转录。2。那个反转录试剂盒里的东西有坏掉的。
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6楼2009-09-28 16:30:23
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zdf68

新虫 (正式写手)
★
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Trizol Trizol抽提试剂
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2楼2009-09-28 11:15:37
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wlwhappy

银虫 (正式写手)
★
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反转录酶挺贵的，我们组大部分都是自己定量的。
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3楼2009-09-28 11:18:18
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
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反转录很大程度上取决于你所提的RNA质量的好坏，纯度和浓度，试剂盒提比较干净，trizol提，仔细操作，特别需要注意RNA容易降解哦
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2009-09-28 11:18:47
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