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xueqiang73

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】用LC-MS测氨基酸

有人做过丹酰氯衍生氨基酸吗?氨基酸样品应该如何配制?我现在配制氨基酸时,是先称量好之后就混合在一起,然后用缓冲溶液溶解,发现有些氨基酸不溶的,所以取样的时候会有固体颗粒;测定时应该注意些什么?

[ Last edited by xueqiang73 on 2009-9-27 at 10:59 ]
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ivlovemoon

银虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
opq691(金币+3,VIP+0):谢谢 9-27 13:46
做过FLD检测和UV检测的,没做过LC-MS
氨基酸标样没什么特别的,直接称取了配。
什么注意的,我只能讲讲HPLC这边的,丹酰氯水解后产生一个较大的水解峰容易与氨基酸衍生物的峰重叠。当流动相的pH值为2.5时,丹酰氯水解峰变狭窄,在流动相中加入1%三乙胺、四丁基氢氧化胺可以改善分离。pH值和离子对是色谱分离的关键。
还有个特别重要的经验,没做过的人可能要搞坏根柱子才知道。。。
一般蛋白质在所建立的色谱条件下不能洗脱,因此在每次样品测定完毕需要用100%甲醇冲洗色谱柱,如果是crude sample直接衍生进样,切记这点。
据另外个师弟称组织匀浆后置于一定量0.020 M EDTA溶液中,再加入10% Cl3CCOOH溶液可以去掉蛋白,你可以查一下
3楼2009-09-27 10:06:27
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achen928

金虫 (小有名气)


opq691(金币+1,VIP+0):谢谢 9-27 13:46
我用过异硫氰酸苯酯的,没用过你那个。还用过邻苯二甲醛的。
2楼2009-09-27 09:30:03
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