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【求助】用LC-MS测氨基酸
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有人做过丹酰氯衍生氨基酸吗？氨基酸样品应该如何配制？我现在配制氨基酸时，是先称量好之后就混合在一起，然后用缓冲溶液溶解，发现有些氨基酸不溶的，所以取样的时候会有固体颗粒；测定时应该注意些什么？ [ Last edited by xueqiang73 on 2009-9-27 at 10:59 ] |
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2楼2009-09-27 09:30:03
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
opq691(金币+3,VIP+0):谢谢 9-27 13:46
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做过FLD检测和UV检测的，没做过LC-MS 氨基酸标样没什么特别的，直接称取了配。 什么注意的，我只能讲讲HPLC这边的，丹酰氯水解后产生一个较大的水解峰容易与氨基酸衍生物的峰重叠。当流动相的pH值为2．5时，丹酰氯水解峰变狭窄，在流动相中加入1%三乙胺、四丁基氢氧化胺可以改善分离。pH值和离子对是色谱分离的关键。 还有个特别重要的经验，没做过的人可能要搞坏根柱子才知道。。。 一般蛋白质在所建立的色谱条件下不能洗脱，因此在每次样品测定完毕需要用100％甲醇冲洗色谱柱，如果是crude sample直接衍生进样，切记这点。 据另外个师弟称组织匀浆后置于一定量0.020 M EDTA溶液中，再加入10% Cl3CCOOH溶液可以去掉蛋白，你可以查一下 |
3楼2009-09-27 10:06:27
