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[交流]
【交流】初接触HPLC时遇到的问题
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大家好！ 我刚接触HPLC，每个样品做两次重复，在处理数据时（主要是保留时间和峰面积）遇到一些问题， 峰面积差别较大时是不是代表不同的物质呢？ 两个重复的数据（保留时间和峰面积）如何确定为同种物质？主要看保留时间还是峰面积？因为有时保留时间很接近但峰面积却差别较大，或者峰面积差不多但保留时间相差较大如0.2s ? 实在感到很困惑，谢谢各位大侠帮忙！ [ Last edited by jw227 on 2009-9-24 at 09:14 ] |
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教！ 9-26 00:43
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首先是同一的液相系统，在同样的液相系统下，2个样品进样后，相同时间出的峰 （出峰时间不一定完全一样的，前后会差个0点几或者0点0几分的），而且峰的分离度比较好，又不在前沿的情况下可以基本确定为同一个化合物，简单来说可以拿化合物的极性举例子，化合物极性大小不同出峰先后不同，峰面积体现的是这个化合物的量，和性质无关，峰面积用来定量，比如你先进已知浓度的对照品，再进样品，通过与对照品相同出峰时间的峰面积比可以得到样品的浓度。 但是，出峰时间会受到很多因素的影响，比如柱温的高低，当然我们一般会用柱温箱来避免，流速的快慢等等。 如果是前沿峰相同时间的话不一定能确定为同一物质，道理很简单，HPLC是分离用的，拿赛跑举例，你和刘翔比赛，比110M栏刘翔快，而且会快很多，这样你和他就分开来了，但是如果只比0.5M的话谁快，也许还是他快，但是你们之间的距离几乎没有，同样的，就是说前沿峰就有可能会是不同的化合物，而且前沿还会有溶剂峰，溶剂也是会有峰的，你可以单独进一针你的溶剂，看看峰是什么样子。 |
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