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tychenxy

金虫 (正式写手)

[交流] 【交流】初接触HPLC时遇到的问题

大家好!
我刚接触HPLC,每个样品做两次重复,在处理数据时(主要是保留时间和峰面积)遇到一些问题,
峰面积差别较大时是不是代表不同的物质呢?
两个重复的数据(保留时间和峰面积)如何确定为同种物质?主要看保留时间还是峰面积?因为有时保留时间很接近但峰面积却差别较大,或者峰面积差不多但保留时间相差较大如0.2s ?
实在感到很困惑,谢谢各位大侠帮忙!

[ Last edited by jw227 on 2009-9-24 at 09:14 ]
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笨学生

金虫 (正式写手)

★ ★
tychenxy(金币+1):谢谢参与
tychenxy(金币+1,VIP+0): 9-23 20:39
当然是时间!面积与进样量有关!最好再检查一下UV是不是也一样!如果有二极管阵列!影响保留时间的因素比较多,如温度变化等!
2楼2009-09-23 20:38:27
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xf4671566

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★
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clkk216(金币+1,VIP+0):谢谢参与虫友讨论~! 9-23 22:56
判断是不是同种物质,主要看保留时间是不是相接近。
要是在没有换流动相,而且机器比较稳定(连续进两针对照品,看看保留时间是不是一样。一样的话或者相差不大于0.2s基本上机器就稳定了)。
还可以把样品和对照品混合在一起,在进一针,观察那个峰面积是不是增大了,这样也可以判断是不是同种物质。
自强不息,努力奋斗!
3楼2009-09-23 20:46:56
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wenyanz

铁虫 (初入文坛)

★ ★
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clkk216(金币+1,VIP+0):谢谢参与虫友讨论~! 9-23 22:56
你的检测器有没有DAD检测器啊··,要是有的话看下光谱图是否一样,就知道是不是同一个物质了;
一般同一天内测的样品,保留时间差异不要超过1min,都是可以接受的··
对于峰面积,高效液相色谱法,两份测定结果的相对平均偏差不得大于2%;
4楼2009-09-23 21:34:02
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ysh2225

木虫 (著名写手)

★ ★
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clkk216(金币+1,VIP+0):谢谢参与虫友讨论~! 9-23 22:56
同意这个,肯定是时间的问题!!领教了
引用回帖:
Originally posted by tychenxy at 2009-9-23 20:33:
大家好!
我刚接触HPLC,每个样品做两次重复,在处理数据时(主要是保留时间和峰面积)遇到一些问题,
峰面积差别较大时是不是代表不同的物质呢?
两个重复的数据(保留时间和峰面积)如何确定为同种物质?主要 ...

5楼2009-09-23 22:16:45
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dezhikong

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
高效液相判断是否是同一物质,主要看保留时间,也可以在样品中加入标准品看峰高变化,当然紫外吸收图谱也可以辅证。
6楼2009-09-25 14:13:13
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hanxing419

银虫 (初入文坛)

★ ★
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karl2100(金币+1,VIP+0):3Q 9-26 00:43
在条件不改变的情况下,根据出峰的时间对照标准品的出峰时间,可以确定是和物质。峰面积大小应该因素很多,检测器灵敏度、进样量大小等等都会有不同的面积。
7楼2009-09-25 20:56:15
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安熙成

银虫 (小有名气)

★ ★
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karl2100(金币+1,VIP+0):多谢指教! 9-26 00:43
首先是同一的液相系统,在同样的液相系统下,2个样品进样后,相同时间出的峰
(出峰时间不一定完全一样的,前后会差个0点几或者0点0几分的),而且峰的分离度比较好,又不在前沿的情况下可以基本确定为同一个化合物,简单来说可以拿化合物的极性举例子,化合物极性大小不同出峰先后不同,峰面积体现的是这个化合物的量,和性质无关,峰面积用来定量,比如你先进已知浓度的对照品,再进样品,通过与对照品相同出峰时间的峰面积比可以得到样品的浓度。
但是,出峰时间会受到很多因素的影响,比如柱温的高低,当然我们一般会用柱温箱来避免,流速的快慢等等。
如果是前沿峰相同时间的话不一定能确定为同一物质,道理很简单,HPLC是分离用的,拿赛跑举例,你和刘翔比赛,比110M栏刘翔快,而且会快很多,这样你和他就分开来了,但是如果只比0.5M的话谁快,也许还是他快,但是你们之间的距离几乎没有,同样的,就是说前沿峰就有可能会是不同的化合物,而且前沿还会有溶剂峰,溶剂也是会有峰的,你可以单独进一针你的溶剂,看看峰是什么样子。
8楼2009-09-26 00:28:38
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cc郭云龙

新虫 (初入文坛)

流动相得梯度变化选择
9楼2009-09-26 08:31:22
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zhouchan03

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
呵呵,你可以看看分析化学书关于高效液相色谱那章啊,上面将得很清楚的呢。保留时间是一个定性指标来的,峰面积是一个定量指标。
10楼2009-09-26 09:00:02
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