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wanghaiyanma新虫 (小有名气)
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【求助】细胞扫描电镜样品的制备方法
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2楼2009-09-23 18:34:02
3楼2009-09-25 09:51:43
诺曼底1227
铁杆木虫 (正式写手)
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主要制备步骤包括固定、脱水及组织干燥。组织干燥或者用临界点干燥法或者用冷冻干燥法。还要给样品包上一层薄金属膜以增加其导电性 固定：最常用的是化学固定法，其中沉浸样品或对动物血管系统进行化学流体灌注是通常采用的固定形式。可以用物理固定法来实现对细胞动态过程的更快速固定，即对样品快速冷冻能够以比化学固定法更快的速度中断细胞运动。固定要考虑以下因素：交联剂的选择；缓冲液的选择(比如，如果加入氯化钙的话，二甲胂酸盐最适合于固定细胞膜)；pH值；温度和每一步的持续时间(单个细胞的固定时间要比组织的固定时间短)；以及使用四氧化锇的后固定操作等 脱水及临界点干燥 标本的水分去除或脱水可通过两种方法实现：1.将标本从水质固定剂环境逐步想更高浓度的乙醇环境转移，最终的脱水剂为纯的乙醇，然后组织标本可用二氧化碳临界干燥法进行干燥处理；2.将样品从水性环境中直接冷冻，将细胞内及细胞外的水分转化为固态。真空条件下，份量不同的水分可通过升华或蚀刻作用得以出去或者样品可以被整个冷冻干燥或者冷冻替换。要去掉低湿SEM观测中产生的细胞外冰晶，必须将样品用蒸馏水冲洗去除缓冲盐溶液，或者在冷冻过程开始前对样品进行预前固定。 样品包被 通过喷镀法或热蒸发用一层薄金属膜包被样品。实施金属膜包被样品的另一条途径是用金属盐溶液处理样品，这样样品表面上也会化学沉积一层金属膜。 |
4楼2009-09-25 16:50:44
qinlinfx
木虫 (小有名气)
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- 专业: 聚合物共混与复合材料
5楼2009-10-02 08:03:48
