应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于同源双交换敲除基因的问题
81/1返回列表
查看: 1102  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

keakye

铜虫 (初入文坛)

[交流] 关于同源双交换敲除基因的问题

求教各位大大，小弟用同源双交换法做一个基因的敲除，现在得到了这个基因的左同源臂和右同源臂的结合序列，该如何插入pEASY-Blunt载体？如何连接到pDS132上？如何抗性筛选一次整合的转化子？还有如何用5％蔗糖板筛选缺失突变体？

问题比较多，主要小弟基础比较差，请各位大大耐心指点，谢谢！
另外小弟是新虫，金币也不多，能帮上小弟的一定金币送上
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2009-09-23 17:23:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
★
keakye(金币+1,VIP+0): 9-24 17:05
可能实验室命名的不同，能不能说下，你的这两个质粒哪个是含有重组系统的？应该是前一个吧！如果敲除的话只用一个同源充足质粒就可以了，你为什么用了两个呢？后一个质粒是用来干嘛的呢？
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-09-23 22:56:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keakye

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2009-9-23 22:56:
可能实验室命名的不同，能不能说下，你的这两个质粒哪个是含有重组系统的？应该是前一个吧！如果敲除的话只用一个同源充足质粒就可以了，你为什么用了两个呢？后一个质粒是用来干嘛的呢？

我也是搞不清楚为什么用两个质粒，不过第一个质粒酶切位点是平末端的，第二个是粘末端的，同源重组时用的是第二个质粒，别的就不知道了。。
赞一下 回复此楼
3楼2009-09-24 08:39:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyy_zzz

木虫 (小有名气)
★
keakye(金币+1,VIP+0): 9-24 17:05
你能把pDS132图谱发上来么？用蔗糖筛选，是不是载体上有SacB基因？同源双交换就是需要用两个同源臂。还有，第一个是不是相当于T载之类的载体？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2009-09-24 08:51:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keakye

铜虫 (初入文坛)
今天问同学搞明白了，谢谢楼上几位了，呵呵
不管怎么说，金币奉上
赞一下 回复此楼
5楼2009-09-24 17:05:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gastrodia

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by keakye at 2009-9-24 17:05:
今天问同学搞明白了，谢谢楼上几位了，呵呵
不管怎么说，金币奉上

搞明白了，把你的思路也分享一下啊，我还不太明白呢，
赞一下 回复此楼
6楼2009-09-24 20:45:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

keakye

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by gastrodia at 2009-9-24 20:45:

搞明白了，把你的思路也分享一下啊，我还不太明白呢，

第一个质粒没有用，就是用来测序时当底版的
第二个质料是自杀型质粒，转入细胞后压力选择到基因组上
然后通过抗性筛选先筛掉没有质粒的细胞
再用蔗糖筛选出不含SacB的细胞，就是需要的类型了
赞一下 回复此楼
7楼2009-09-26 12:17:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

scelab
－
8楼2009-10-09 13:54:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 keakye 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭