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fallstone

[交流] 大肠杆菌表达蛋白心得体会

各位大侠:
有做细菌表达的朋友吗?如果有,交流一下心得体会。先说明了,我是新小木虫,想求助点文献,可是啊,没有金币啊,也不知道发这个帖子能否为我换回点金币,也请大侠们指点一二啊,怎样获得金币!!!
言归正传,前几次做大肠杆菌表达,一个偶然,发现这么一个现象:将表达菌涂布平板后,在冰箱(4℃)放置10天后,挑克隆,接种,然后诱导,同样表达出了目的蛋白,而且表达量感觉没有下降。
大家都知道,我们原来的概念是,转化-涂布平板-挑单克隆-接种-诱导表达是一条龙下来的,原来老师给我讲的是,只能从新涂布的平板上挑克隆,否则表达量很低,或者表达失败。
这个经验也请大家试试。它最大的好处是减少了工作量,做一次转化,可以做多次表达,节省时间。


[ Last edited by amisking on 2009-11-28 at 12:05 ]
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zier1011

木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+4,VIP+0): 12-6 12:02
本人不理解,你放4度10天,比你不放10天的平板,除了菌活力会有所下降外,还有什么别的用处?
重组菌的成功与否,在菌落长出来的时候,就一定确定了,表达量的多少,只跟你的重组菌和诱导条件有关,你放置的时间不能改变你的重组菌所携带质粒的基因序列,所以在诱导条件不变的情况下,不能改变蛋白的表达能力!
只能降低菌种活力,而且随着时间的延长,菌种活力越来越低,最后死掉!
花还香香的
23楼2009-12-04 11:15:37
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fallstone

大家可以试试哦!
2楼2009-09-22 15:47:23
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qingshaojun0823

荣誉版主 (文坛精英)

LOVE

优秀版主

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
zhuimengren639(金币+1,VIP+0):鼓励一下,很贴心哦! 9-22 23:09
对于新虫,可以去新手上路版块
http://muchong.com/bbs/forumdisplay.php?fid=215
那里有关于介绍如何赚取金币!
大海能吞噬想往的生命,但吞噬不了生命的想往!
3楼2009-09-22 18:00:17
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fallstone

谢谢!


yxfei1220(金币+1,VIP+0):鼓励你一下吧 9-23 11:38
朋友介绍来到这里,觉得很有意思的。
4楼2009-09-23 09:08:21
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