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gentledragon金虫 (正式写手)
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【求助】微粒体体外代谢实验 技术细节问题 关于孵育
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请教各位大侠： 本人目前在进行大鼠的肝微粒体体外代谢的抑制实验，微粒体购自sigma，各种亚酶抑制剂购自sigma或阿拉丁。 孵育步骤： 首先，配置tris缓冲液0.15mol/L,含5mmol的mgcl2，pH7.4 第二，取微粒体（溶于缓冲液）1.13636mg/mL 440uL，加入5mM/L的底物 5uL,加入抑制剂酮康唑5uL（5mM/L） ，以上体系中最后加入NADPH 50uL （ 20mmol/L）。然后37度孵育1h。反应后，萃取出底物，看底物被代谢的程度，但最后发现，无论是加抑制剂组和不加抑制剂组均未发现代谢发生，底物未见量降低。而文献报道次底物可被代谢。请指教我的实验中的问题和错误。 缓冲体系中是否需要加入其他必的东西呢？ [ Last edited by gentledragon on 2009-9-22 at 10:05 ] |
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