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木虫 (小有名气)

[交流] 中科院试题

中国科学院上海生化与细胞所2002年招收硕士研究生入学考试：［细胞生物学B］"标准答案"
考 试 科 目 ：细胞生物学(B)
报 考 单 位 ：中科字上海生命科学院
报 考 方 向 ：神经生物学
1． 以上各项除试卷密呈外必须填写清楚。
2． 答题必须一律写在试卷上，并写清题号。
3． 字迹清楚，保持卷面清洁。
4． 试题随试卷交回。
5． 草稿纸另发，考试结束后统一收回。
6． 阅卷时由招生单位按虚线右半页裁下，另编试卷密号。
一、是非题：20题，每题1分，共20分。答"是"写"+"，答"非"写"-"，答案写在括号内。
1．细胞的体积有大小不同，但各种细胞核的大小常县殊不大。 (+)
2．植物细胞通常不表现动物细胞所表现的衰老过程。 (+)？
3．体外培养的细胞，一般保持体内原有的细胞形态民。 (-)
4．G蛋白偶联受体被激活后，使相应的G蛋白解离成α、β、γ三个亚基，以进行信号传递 (-)
5．膜蛋白的跨膜区均呈α螺旋结构。 (+)？
6．胞外基质(extracellular matrix)主要用于用于维持组织结构，对细胞功能的影响不大 (-)
7．中心粒和基体均不具有自我复制性质 (-)
8．肌球不具有ATP酶活性。 (+)
9．细胞中所有的微丝均为动态结构。 (-)
10．与微丝不同，中间纤维蛋白合成后，基本上均组装为中间纤维，没有大量游离的单体存在 (+)
11．核糖体存在于一切细胞内。 (-)
12．在所有动力动物细胞中，中心体是主要的微管组织中心。 (-)
13．将光驱动的质子泵----噬盐菌菌紫质(bacteriorhodopsin)与ATP合成酶置于同一脂质体中，在光照下可由ADP和磷酸产生ATP。 (+)
14．蛋白核定位信号(nuclear localization signal)富含碱性氨基酸。 (+)
15．细胞周期中，在G1/S 和G2/M处都有检验点(chekpoint)。 (+)
16．中国科学家在人类基因组计划中完成了约1%基因组的测序。 (+)
［答题技术：这样的题目一定是正确的!因为中国人好大喜功。］
17．永生细胞和癌细胞的主要共同点就是既没有细胞分裂次数的限制，也没有细胞间的接触抑制。 (-)
18．有亮氨酸拉链模式(Leucine-Zipper motif)的Jun和fos蛋白质是以二聚体或四聚体的形式结合DNA的。(-)
19．细胞的分化是多细胞生物体发育的基础，也是单细胞生物体生活的周期变化的基础。 (+)
20．就是在理论上也不是所有的分化细胞都可以发生去分化现象的。 (+)
二、选择题：20题，每题1分，共20分。将所选择答案的字母写在括号内。
1．最小最简单的细胞是： (B)
A．病毒； B。支原体；C。细菌 D。红细胞
2．扫描电子显微镜可用于： (D)
A． 获得细胞不同切面的图象； B观察活细胞；
B． 定量分析细胞中的化学成份； D 观察细胞表面的立体形貌
3．建立分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞是通过下列技术构建的： (A)
A 细胞融合；B 核移植；C 病毒转化；D 基因转移
4．能抑制CDK活性的酶是： (A)
A．Well B. CAK C.cdc25 D.p21
5．细胞变形足(lamellipodia)的运动主要是通过什么所引起： (B)
A 微管的动态变化；B 肌动蛋白的装卸
C 肌球蛋白丝的滑动；D 微绒毛的伸缩
6．线粒体呼吸链的酶复合物IV为： (D)
A NADH脱氢酶；B 琥珀酸脱氢酶；
C 细胞色素C还原酶；D 细胞色素C氧化酶
7．不属于蛋白酪氨酸激酶类型的受体是： (C)
A EGF受体；B PDGF 受体；
C TGFβ受体；D IGF-1受体
8．中心粒的复制发生在哪期： (B)
A．G1； B S; C G2; D M；
9．所有膜蛋白都具有方向性，其方向性在什么部位中确定： (C)
A．细胞质基质；B 高尔基体；C 内质网；D质膜
10．微管蛋白在一定条件下，能装配成微管，其管壁由几根原纤维构成： (C)
A．9；B 11；C13；D 15；
11．膜蛋白高度糖基化的细胞器是： (A)
A．溶酶体；B 高尔基休；C 过氧化物酶体； D 线粒体
12．什么蛋白是一种马达蛋白(motor protein)： (D)
A tau 蛋白；B肌动蛋白(actin);
C 肌球蛋白(myosin); D 驱动蛋白(kinesin)
13．异染色质是： (B)
A 高度凝集和转录活跃的；B 高度凝集和转录不活跃的
C 松散和转录活跃的； D 松散和转录不活跃的
14．下面哪个有关DNA复制的描述是错误的： (D)
A 细菌染色体复制是从一个原点开始；
B 真核细胞染色体复制是从多个原点开始；
C 高度凝集的染色质复制较晚，而转录活跃的染色质复制较早；
D 真核细胞染色体的每个细胞周期中仅复制一次因为S期时间很短
15．下面哪个有关核仁的描述是错误的： (C)
A 核仁的主要功能之一是参与核糖体的生物合成
B rDNA定位于核仁区内；
C 细胞在G2期，核仁消失
D 细胞在M期末和S期重新组织核仁
16．核小体包含有： (A)
A H2A, H2B,H3, H4各两个分子
B H2A,H2B各4 个分子；
C H3,H4各4个分子；
D H2A, H2B,H3,H4各1 个分子，以及4 个非组蛋白分子
17．癌细胞通常由正常细胞转化而来，与原来的细胞相比，癌细胞的分化程度通常表现为： (B)
A 分化程度相同；B 分化程度低
C 分化程度高； D 成为了干细胞
18．下列基因中不是癌基因的是： (A)
A Rb;; B Jun;; C Ras;; D fos;;
19．从体细胞克隆高等哺乳动物的成功说明了： (C)
A 体细胞的全能性；B体细胞去分化还原性；
C 体细胞核的全能性；D 体细胞核的去分化还原性
20．细胞分化方向决定的细胞与干细胞相比： (B)
A 已经发生了形态特征的变化；
B 没有发生形态特征的变化；
C丧失了细胞分裂能力；
D分化细胞特有功能的获得
三、简答题：7题，每题4分，共28分。
1． 什么是原位杂交？
2． 细胞通讯有哪三种方式？
3． 什么是GTP酶活化蛋白(GTPase-acivating protein,GAP)
4． 举例说明位置效应(position effect)
5． 为什么在骨髓瘤细胞中提取的免疫球蛋白分子的N端比分泌到细胞外的免疫球蛋白分子N端氨基酸序列多出一截？
6． 在用琼脂糖凝胶检测凋亡细胞的基因组DNA时，观察到的是什么样的带型？为什么？
7． 癌基因和抑癌基因的特点是一旦发生突变，所在的细胞都能被转化为癌细胞。为什么一个叫癌基因，一个叫抑癌基因。
［此次出的关于癌方面的题目相当多。下面还有
做类题目答好要点就可以了。要有头绪，不要乱，因为前面的客观题做完后还有大量的时间。
此类题可"抄"书。］
A卷以上相同，以下题目也非常相似。但是A类是在以下问答量的回答方式上有点变化。
A卷更注重创新
四、问答题：4 题，每题8分，共32分。
1． 何谓成熟促进因子(MPF)？如何证明某一细胞提取液有MPF？
2． 请列出三种胞质骨架成分的主要差别。(列表从其成分、分子量、直径、纤维结构、有无极性、有无踏车行为、有特异性药物等七个方面加以说明。)
3． 某实验室从酵母中克隆了一基因，并发现它的蛋白产物与细胞周期的调控有关。为了研究其在人细胞中同源的作用，请设计一套研究方案。
4． 何谓受精卵、胚胎干细胞、多能干细胞和单能干细胞？相互之间有何关系？
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1楼 2005-12-18 02:22:12
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yanbiaoo

木虫 (小有名气)

特殊组织DNA的提取及鉴定

分享－特殊组织DNA的提取及鉴定


1、提取DNA的简易方法:
  1)、从全血中提取DNA：取20μl抗凝血于0.5ml无菌管中，加500μl左右的ddH2O混匀后，12000rpm离心2分钟，弃上清，（若沉淀中仍 有红细胞,需重复此操作1-2次）加入样品提取液20μl,混匀,100℃煮10分钟(可在扩增仪上进行)后12000rpm离心5分钟,取上清2μl进行扩增。
  2)、从其它有核细胞中提取DNA：可直接加适量的样品提取液到装有发根、头屑、骨髓、精子、组织碎片等有核细胞的管中,100℃煮10分钟（可在扩增仪上进行）后12000rpm离心5分钟，取上清进行扩增。
2、从全血中用有机溶剂提取DNA：
  1）试剂
    a.10%SDS
    b.2.0M醋酸钠
    c.20mg/ml蛋白酶K
    d.苯酚：氯仿：异戊醇(25:24:1)
    e.分析纯乙醇
    f.TE(10mM Tris,1.0mMEDTA溶液,Ph7.5)
  2）步骤
    A、血液样本收集于含EDTA的抽血用管子中，样品用手倒转试管混合后等分。每份700μl全血可放在1.5ml的塑料离心管中，-70℃储存。
    B、在解冻的（或液体的）血液中加入800μl的TE并混匀，12000rpm离心2分钟。
    C、吸取1.0ml上清液并弃去。
    D、加入1.0mlTE,振荡后离心2分钟,去除尽可能多的上清液,但不要影响沉淀。
    E、向沉淀中加入：375μl 2M醋酸钠; 25μl 10%SDS;5μl 蛋白酶K溶液。略加振荡，于56℃保温一小时。
    F、加入120μl苯酚/氯仿/异戊醇，振荡30秒。
    G、12000rpm离心5分钟。
    H、小心移出水相（上层）到一新的1.5ml的离心管中。
    I、向水相中加入2.5倍体积预冷的分析纯乙醇，倒转试管加以混合，将试管于-20℃下放置10分钟以上。
    J、12000rpm离心10分钟。
    K、倾去酒精，用移液器小心吸去剩余酒精，不要触动沉淀。
    L、加180μl TE 后振荡。加20μl2M醋酸盐，手工混匀。
    M、加500μl预冷分析纯酒精，用手轻轻混匀，12000rpm离心10分钟，倾去上清液。
    N、用室温下的70%酒精1ml洗涤DNA沉淀,12000rpm离心5分钟，倾去上清液。
    O、用移液器吸去残余的酒精，管子置于真空离心抽除残余的酒精（大约10分钟）。或将管子放在100℃以下烘干。
    P、加200μl TE于DNA沉淀中，混匀后于4℃保温过夜（或56℃溶解DNA 2小时以上），次日清晨振荡10秒。
  3、从斑痕材料中用有机溶剂提取DNA
  1)试剂
    a.斑痕抽提缓冲液（1.21g Tris,5.84gNaCl,6.02g二硫苏糖醇，       2%SDS,10mMEDTA/升,Ph8.0）
    b.其它试剂见2.1)
  2)步骤
  A、将斑痕剪成碎片后置于1.5ml的塑料离心管中。
  B、加400μl斑痕抽提缓冲液及10μl鞍酌窴溶液，混匀，离心数
  秒使碎片浸入液体。
  C、于56℃保温过夜。
  D、用一新的灭菌牙签将碎片中的液体拧干后从管中取出。
  E、加500μl苯酚/氯仿/异戊醇，手摇混匀，12000rpm离心3钟。
  F、将上清液转移到新的离心管。
  G、上清液中加入2.5倍体积预冷的分析纯酒精。
  H、手摇混匀试管中的各种成分，放置-20℃10分钟以上。
  I、12000rpm离心10分钟。
  J、倾去酒精。
  K、用1ml室温的70%酒精洗涤。
  L、12000rpm离心5分钟。
  M、倾去酒精，用移液器吸去残余酒精。
  N、真空离心10分钟除去残余酒精，或在100℃以下烘干.
  O、56℃下用36μl TE溶解DNA，时间至少2小时。
  4、从精斑中分离提取DNA
    1）试剂
    a.TNE缓冲液（1.21g Tris,5.84gNaCl,0.37gEDTA/升）
    b.20%sarcosyl
    c.0.39M二硫苏糖醇
    d.其它试剂见2.1)
    2)步骤
    A、从棉签上取下有检材的棉花并置于1.5ml塑料离心管中。
    B、管中加入400μl TNE缓冲液；25μl 20%sarcosyl;75μl水；5μl蛋白酶K溶液。手摇混匀，37保温2小时。
    C、用一新的灭菌牙签将棉花拧干后从管中取出，再用12000rpm离心5分钟。
    D、移上清液（内含裂解细胞或"雌性"片段）于一新的1.5ml管，不要振荡沉淀物（内含非裂解细胞或精子）。再用TNE洗脱沉淀物四次。
    E、在有沉淀的管中加入10μlTNE;50μl20%sacrosyl;40μlDTT;150μl水；10μl蛋白酶K溶液。手摇混匀，37℃保温2小时。
    F、按3，2）E～O的方法分别抽提出两管中的雌性DNA和精子DNA。
  5、用Chelex从全血/血斑中抽提DNA
    1）试剂
    a.TE
    b. 5%Chelex 100(w/v于无菌水中)
    2）步骤
    A、3μl全血或3mm×3mm的血斑置于灭菌的1.5ml离心管中，加入灭菌的1mlTE于管中，振荡数秒。
    B、置于室温30分钟，振荡数秒。
    C、用12000rpm离心3分钟。
    D、弃上清液，保留足够上清液盖没沉淀，勿搅起沉淀。
    E、加入200μl 5%Chelex，振荡数秒。
    F、于56℃保温30分钟。
    G、振荡数秒。
    H、沸水浴8分钟。
    I、振荡数秒。
    J、用12000rpm离心5分钟，上清中为提取的DNA。
  6、用Chelex从精斑中抽提DNA
    1）试剂
    a.TE
    b.10mg/ml蛋白酶K
    c.20% Chelex100（w/v于无菌水中）
    d.洗脱缓冲液(10mM Tris,10mM EDTA,50mMNaCl,2%SDS,Ph7.5)
    e.1M二硫苏糖醇
    2）步骤
    A、将附有检材的棉签或纤维置于1.5ml灭菌离心管中，加1ml灭菌的TE，振荡数秒。
    B、室温30分钟。
    C、振荡数秒。
    D、用一新的灭菌牙签将残片拧干后从管中取出。
    E、用12000rpm离心3分钟。
    F、弃去上清液，但保留约50μl上清液，勿使"细胞沉淀"搅起（若沉淀体积较大，应保留更多上清液，在此例中，保留的上清液体积应为沉淀的2倍）。
    G、加150μl灭菌的蒸馏去离子水和2μl蛋白酶K溶液。
    H、56℃保温1小时以裂解非精子细胞。
    I、用12000rpm离心5分钟，沉淀为"精子沉淀"。
    J、取150μl上清液（含裂解细胞组分）及到一新的1.5ml离心管中，再加50μl 20%Chelex，振荡数秒后，稍加离心，然后接步骤O～S进行操作。
    K、用0.5ml洗脱缓冲液重新悬浮原管中的沉淀，略加振荡, 用12000rpm 离心5分钟，弃去约450μl上清液。
    L、重复步骤K再洗四次。
    M、用1ml灭菌的蒸馏去离子水重新悬浮沉淀，稍经振荡，用12000rpm离   心5分钟，弃去950μl上清液。
    N、加150μl的5%Chelex，2μl蛋白酶K溶液，7μl 1M的二硫苏糖醇   于"精子组分"，振荡数后，稍加离心。
    O、56℃保温1小时。
    P、振荡各管数秒。
    Q、样品于沸水浴8分钟。
    R、振荡数秒。
    S、用12000rpm离心3分钟，两管的上清中分别含有非精子细胞DNA和精   子细胞DNA。
  四、PCR扩增:
  取一支离心管，加（反应管数+1）×（2μl 10×引物混合物+2μl   10×反应混合物+0.4μl HS-Taq（用前必须用手弹匀），混匀后，每个反应管分装4.4μl，然后,加提取的DNA2μl,再加13.6μl ddH2O和一滴石蜡油,（若模板DNA浓度太低,可适当增加其体积,但同时要减少ddH2O体积,以保持总反应体积为20μl）稍离心后按下列条件进行扩增：95℃预变性5分钟，然后94℃变性30秒；63～56℃退火30秒（每循环一次降低一度）；72℃延伸1分钟，共循环30次。最后72℃保温10分钟。
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2楼2005-12-18 02:23:56
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复旦大学 动物学笔记

普通动物学
●主讲：复旦大学生命科学学院　杨琰云
绪论
1.1　动物学的涵义
动物学是生命科学研究的一大分支，是以动物为研究对象，以生物学的观点和方法，系统地研究动物的形态结构、生理、生态、分类、进化、与人类的关系的科学。

1.2　研究动物学的基本观点和方法
自然界是一个相互依存，互相制约，错综复杂的整体，动物是生物界的一个组成部分。要学习研究生命科学，首先要具有正确的生物学观点。对复杂的生命现象的本质的探讨，不能用简单的方法做出结论，需要用生物学的观点善于对科学的事实加以分析和综合。

2.1　基本观点
生物学观点：动态地注意形态与功能的统一，生物体对环境的适应，整体与局部之间的相互关系，有机体各层次之间的联系，以及个体发育与系统发育的统一。

2.2　基本方法
2.2.1　观察描述法
观察是动物学研究最基本的方法，通过观察从客观世界中获得原始第一手材料。
科学观察的基本要求是客观地反映所观察的事物，并且是可以检验的。观察结果必须是可以重复的。只有可重复的结果才是可检验的，从而才是可靠的结果。
观察需要有科学知识。观察切不可为原有的知识所束缚。
描述即将观察的结果如实地记录下来。
包括：文字描述、绘图（生物图）、摄影、摄像、仪器记录

2.2.2　比较法
没有比较就没有鉴别没有比较就无从揭示生命的统一性和多样性之间的关系。
没有比较无法处理生物界从简单到复杂，从低等到高等的大量材料。
只有通过对不同种属动物从宏观的形态结构到微观的细胞、分子水平的比较，才能对有关动物学的各种问题进行研究并得到正确的结论。

2.2.3　实验方法
实验是在人为地干预、控制所研究对象的条件下对动物生命现象进行观察研究的方法。

3　动物学课程的教学要求
用生物学的观点和比较分类、归纳求同、演释推理的方法，掌握动物的体制结构，形态机能，生活习性和生活规律等基础知识，并加深对以动物代谢和适应为中心，发育为骨干，及动物界的个体发育与系统发育的统一、形态与机能的统一、机体与环境的统一的动物学原理的理解。
3.1　教材：“基础动物学”全国统编教材修订本
3.2　参考书
“普通生物学”   顾宏达主编    复旦出版社
“动物学大全”   [美]克利夫兰   科学出版社
3.3　网址：基础生物学实验室网页
http：//10.24.14.111/bblfu
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3楼2005-12-18 02:26:46
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