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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wxmwqr

金虫 (小有名气)

[交流] 如何配置NADH再生系统

如何配置NADH再生系统

现在做肝微粒体和线粒体孵育实验。
想比较不同辅酶主要是NADPH和NADH对实验的影响。

这两种辅酶有商品可以买到。同时多数文献使用ＮＡＤＰＨ再生系统（NADP+, G6PDase, MgCl2, G6PO4, Buffer)。

但是没有发现使用ＮＡＤＨ再生系统的文献。

请问ＮＡＤＨ再生系统如何配置？
是否可以借鉴ＮＡＤＰＨ再生系统，将G6PDase和 G6PO4,分别换成D-LDH 和　lactate 就可以了？

谢谢！
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1楼 2009-09-19 05:40:01
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gwi2050

金虫 (小有名气)

虫
• 1.6 mg NADP 溶于1.6 mL 0.1 M 磷酸盐缓冲液，pH 为7.4
• 50 mM 异柠檬酸盐/MgCl2(将203 mgMgCl2.6H2O + 258.1 mg 异柠檬酸盐溶
于20 mL 水中)
• 异柠檬酸脱氢酶0.33 unit/μL
NADPH 再生系统：1.6 mL NADP 溶液+1.6 mL 异柠檬酸盐溶液+ 100 μL IDH
溶液。
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gwi
2楼2009-09-19 07:50:39
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llyz0825

木虫 (著名写手)
http://www.dcb.org.tw/Default_Page.aspx?IOE=O&code=1334
楼主可以看看这个网址
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3楼2009-09-19 08:00:55
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ZANCAI

新虫 (著名写手)
将质粒平均分配基因parDE引入重组质粒pDK7-fdh(携带甲酸脱氢酶基因fdh)中,得到基因重组菌F6.考察了F6与未引入parDE基因的基因重组菌FY(含重组质粒pDK6-fdh)和F-1(含重组质粒pMAL-p2X-fdh)的质粒遗传稳定性及甲酸脱氢酶活性的差异.结果显示,F6传代160代后,仅有3%的菌质粒丢失,而基因重组菌F-1和FY(均只携带fdh基因)传代160代后,丢失质粒的菌分别占93%和78%.传代160代后,F6的甲酸脱氢酶比酶活为2.77 U/mg,比传代前降低1.77%,FY为2.02 U/mg,F-1与野生型菌株M5al相近,为1.33 U/mg.结果表明,引入parDE基因的基因重组菌质粒稳定性和甲酸脱氢酶活性均远高于未引入parDE基因的基因重组菌.
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4楼2009-09-19 09:48:40
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wxmwqr

金虫 (小有名气)
非常感谢楼上两位的帮助。

但是我知道ＮＡＤＰＨ再生系统的配置。我想知道的是ＮＡＤＨ再生系统的配置方法，而且这个系统，要应用在肝微粒体酶孵育上的，而不是工业生产的。
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5楼2009-09-19 09:48:52
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