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wxmwqr金虫 (小有名气)
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如何配置NADH再生系统
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如何配置NADH再生系统 现在做肝微粒体和线粒体孵育实验。 想比较不同辅酶主要是NADPH和NADH对实验的影响。 这两种辅酶有商品可以买到。同时多数文献使用ＮＡＤＰＨ再生系统（NADP+, G6PDase, MgCl2, G6PO4, Buffer)。 但是没有发现使用ＮＡＤＨ再生系统的文献。 请问ＮＡＤＨ再生系统如何配置？ 是否可以借鉴ＮＡＤＰＨ再生系统，将G6PDase和 G6PO4,分别换成D-LDH 和 lactate 就可以了？ 谢谢！ |
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2楼2009-09-19 07:50:39
llyz0825
木虫 (著名写手)
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- 专业: 药物化学
3楼2009-09-19 08:00:55
| 将质粒平均分配基因parDE引入重组质粒pDK7-fdh(携带甲酸脱氢酶基因fdh)中,得到基因重组菌F6.考察了F6与未引入parDE基因的基因重组菌FY(含重组质粒pDK6-fdh)和F-1(含重组质粒pMAL-p2X-fdh)的质粒遗传稳定性及甲酸脱氢酶活性的差异.结果显示,F6传代160代后,仅有3%的菌质粒丢失,而基因重组菌F-1和FY(均只携带fdh基因)传代160代后,丢失质粒的菌分别占93%和78%.传代160代后,F6的甲酸脱氢酶比酶活为2.77 U/mg,比传代前降低1.77%,FY为2.02 U/mg,F-1与野生型菌株M5al相近,为1.33 U/mg.结果表明,引入parDE基因的基因重组菌质粒稳定性和甲酸脱氢酶活性均远高于未引入parDE基因的基因重组菌. |
4楼2009-09-19 09:48:40
wxmwqr
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5楼2009-09-19 09:48:52