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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助！！！真菌RNA的提取方法
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陈思容

铜虫 (正式写手)

[交流] 求助！！！真菌RNA的提取方法

我要从总的RNA里面P出相关的基因！问题是不知道选用那种方法比较好，是一株烟曲霉，现在已经把摇瓶培养48h,72h的菌体用液氮保存在-80°冰箱里，TRIZOL法，或者是异硫酸氰胍法，有哪位高手指点一下
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1楼 2009-09-18 13:28:33
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
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amisking(金币+3,VIP+0): 10-7 16:56
amisking(金币-3,VIP+0):其他版主已经奖励过，所以扣除！~ 10-7 16:57
菌体用液氮保存在-80℃冰箱里？这句话有点问题......到底是-80冰箱还是液氮啊~？

提取的话，可以首先用研钵将菌体在液氮中研磨成粉末，然后加TRIzol，后面的步骤都差不多，不赘述了。

建议每次都用新鲜的菌，效果会比较好。
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2楼2009-09-18 13:34:28
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陈思容

铜虫 (正式写手)

谢谢！

加入液氮后放入-80°冰箱，TRIZOL法师姐说提取培养细胞中的RNA才用的
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3楼2009-09-18 13:40:45
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
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司马诸葛(金币+3,VIP+0):谢谢交流 9-18 15:18
加入液氮后放-80冰箱~？呃...很有意思的保存方法。过段时间拿出来，液氮还有吗？

TRIzol用的很多啊，植物、细菌、昆虫等都可以用。不过有一个问题，对真菌来说，液氮研磨可能还不足以破坏它的细胞壁，所以可能还需要用裂解液破壁，然后再加TRIzol。

裂解液的话...你得自己找配方了。

[ Last edited by holyala on 2009-9-18 at 13:54 ]
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4楼2009-09-18 13:51:09
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陈思容

铜虫 (正式写手)

谢谢

加液氮保存的目的是为了防止反复冻融！师姐说那个Ttrizol不好用的！异硫酸氰胍法不行吗？
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5楼2009-09-18 14:04:17
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linxi8579

铜虫 (正式写手)
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液氮研磨新鲜菌丝，当然菌丝水要脱净，最好用抽滤机处理菌丝。然后加裂解液，这些可以的话用试剂盒来做吧。要经常换手套的，戴口罩的。
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6楼2009-09-18 14:06:54
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陈思容

铜虫 (正式写手)
试剂盒，我也想用啊！周围实验室大都用，我们老板很反感用试剂盒之类的东西！没办法，只有配溶液自己提了！脱水的话没有其他方法吗，实验室抽滤机不好用
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7楼2009-09-18 14:10:18
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holyala

木虫 (著名写手)

砖家
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amisking(金币+2,VIP+0): 10-7 16:57
异硫氰酸胍当然也可以......其实RNA提取最重要的就是避免RNase污染导致降解，其它的都好办。TRIzol也好，异硫氰酸胍也行，都能提出来的，只是效率上略有差异罢了。

至于脱水~~除了抽滤，我只能想到真空冷冻干燥，不过这个恐怕更麻烦

P.S. 老板反感试剂盒...多半是嫌贵。以前我们的小老板也这样，呵呵。
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8楼2009-09-18 14:23:08
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陈思容

铜虫 (正式写手)

谢谢

恩，周末先试着用异硫酸氰胍法做下吧！还有就是关于PCR产物的测序问题，师姐说是要用到M13，有人说T载体，总之我不知道PCR完了以后到底是怎么测序的
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9楼2009-09-18 14:51:21
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guoguotianwai

金虫 (小有名气)
RNA提取有专门的试剂盒提取，只不过要防止被降解。
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10楼2009-09-19 09:35:35
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