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怎么把四个目的片段用NEB无缝连接酶连接到一起啊
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最近在做基因定点突变，想用同源重组的方法替换掉目的基因，设计了四个片段，左同源臂，抗性基因，目的片段，右同源臂，以下简称ABCD，我把这四段片段都扩了出来，但不能将四个片段用NEB酶连接起来，该怎么办啊？求大神指教啊 @starseacow 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2023-01-07 09:23:13
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怎么才算合适啊？我的A、B、D都是1000bp左右，C是2500bp，A、B的浓度是350ng/ul,C、D浓度是150ng/ul左右，A和B初次连接用两端的引物可以扩出来条带，但是把条带胶回收当模板扩，只有一条暗的条带，反而单独的A、B条带变亮了，C和D试了几次，都连不上 发自小木虫Android客户端 |
3楼2023-01-09 09:35:05