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嗒哒嗒哒

新虫 (初入文坛)

[求助] 怎么把四个目的片段用NEB无缝连接酶连接到一起啊

最近在做基因定点突变,想用同源重组的方法替换掉目的基因,设计了四个片段,左同源臂,抗性基因,目的片段,右同源臂,以下简称ABCD,我把这四段片段都扩了出来,但不能将四个片段用NEB酶连接起来,该怎么办啊?求大神指教啊

@starseacow 发自小木虫Android客户端
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biosci

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2楼2023-01-07 09:23:13
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嗒哒嗒哒

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2023-01-07 09:23:13
片段的摩尔比很重要

怎么才算合适啊?我的A、B、D都是1000bp左右,C是2500bp,A、B的浓度是350ng/ul,C、D浓度是150ng/ul左右,A和B初次连接用两端的引物可以扩出来条带,但是把条带胶回收当模板扩,只有一条暗的条带,反而单独的A、B条带变亮了,C和D试了几次,都连不上

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3楼2023-01-09 09:35:05
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