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X似水流年X

新虫 (小有名气)

[求助] 插入EGFP片段不发荧光 已有1人参与

请问我将EGFP片段替换掉细菌一个基因的终止密码子,构建成融合蛋白,想观察它的荧光情况,可是根本看不见荧光怎么办,我已经筛选出插入成功的了,而且提取总rna验证EGFP片段已经插入进去,可是就是不发荧光,是因为融合蛋白阻碍发光吗

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hutil1543

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

有可能是蛋白可溶性被破坏了,不可溶的情况下会出现没有荧光的情况。
8楼2023-02-02 10:17:54
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


你可能没有构建好吧,获得的是单交换突变体

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2楼2022-12-31 22:43:42
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X似水流年X

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biosci at 2022-12-31 22:43:42
你可能没有构建好吧,获得的是单交换突变体

你好,是这样我已经通过蔗糖第二次筛选,然后验证的时候是单条带,和我构建质粒上的片段长度一致,请问是我这种插入方法有问题吗

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3楼2023-01-04 22:12:31
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)


4楼2023-01-05 20:49:43
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