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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR温度（请教）
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fgwx

金虫 (正式写手)

[交流] PCR温度（请教）

5’ primer:的GC含量是45.5%，Tm值是61.1℃    22bp
3’ primer: 的GC含量是 36%， Tm值是 55.6℃  25bp

PCR退火温度应该设多少呢？是根据什么来的啊？谢谢了
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1楼 2009-09-17 08:20:17
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ychh521

木虫 (小有名气)
★
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一般的退火温度比Tm值低4--5度，上游引物和下游引物的Tm值相差最好不要超过2度，你这种情况只有做个梯度比较一下才能知道哪个温度最合适。
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14楼2009-09-18 09:40:48
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雨雪霏霏9992

★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 9-17 22:12
你可以做个梯度PCR测试一下，这样得到的比较准确
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2楼2009-09-17 08:25:56
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 9-17 22:12
你用引物合成单上面50mM Na+的Tm值加5度以上即可
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3楼2009-09-17 09:00:46
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Charlie1331

金虫 (正式写手)
★
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这个也和你用什么酶有关系的……
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4楼2009-09-17 09:30:01
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