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fgwx

金虫 (正式写手)

[交流] PCR温度(请教)

5’ primer:的GC含量是45.5%,Tm值是61.1℃    22bp
3’ primer: 的GC含量是 36%, Tm值是 55.6℃  25bp

PCR退火温度应该设多少呢?是根据什么来的啊?谢谢了
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雨雪霏霏9992

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 9-17 22:12
你可以做个梯度PCR测试一下,这样得到的比较准确
2楼2009-09-17 08:25:56
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 9-17 22:12
你用引物合成单上面50mM Na+的Tm值加5度以上即可
3楼2009-09-17 09:00:46
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Charlie1331

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这个也和你用什么酶有关系的……
4楼2009-09-17 09:30:01
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dingyanhua

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
你可以做个梯度啊!检测一下哪个温度最合适!你可以做从54度到67度的梯度
5楼2009-09-17 09:55:49
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dingyanhua

铜虫 (小有名气)


amisking(金币+1,VIP+0): 9-17 22:12
应该是54到62度之间的温度梯度刚才打错了
6楼2009-09-17 09:56:49
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jianhuafly

铜虫 (小有名气)

梯度PCR 很方便
7楼2009-09-17 10:10:22
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fgwx

金虫 (正式写手)

谢谢了各位虫友,呵呵,刚开始做,不太懂,

学习各位虫友的建议
8楼2009-09-17 10:37:09
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woaixiaomuchong

铁虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 9-17 22:13
Tm值是 55.6℃  25bp,应该用Tm值低的,可以用54度试一下,Tm值接近的话比较好
htklz
9楼2009-09-17 17:20:35
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changes

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
从56~63度之间每隔2~3度设个梯度温度试试。PCR这个东西和许多因素都有关。
10楼2009-09-17 19:19:28
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