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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR温度（请教）
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fgwx

金虫 (正式写手)

[交流] PCR温度（请教）

5’ primer:的GC含量是45.5%，Tm值是61.1℃    22bp
3’ primer: 的GC含量是 36%， Tm值是 55.6℃  25bp

PCR退火温度应该设多少呢？是根据什么来的啊？谢谢了
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1楼 2009-09-17 08:20:17
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雨雪霏霏9992

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0): 9-17 22:12
你可以做个梯度PCR测试一下，这样得到的比较准确
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2楼2009-09-17 08:25:56
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 9-17 22:12
你用引物合成单上面50mM Na+的Tm值加5度以上即可
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3楼2009-09-17 09:00:46
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Charlie1331

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
这个也和你用什么酶有关系的……
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4楼2009-09-17 09:30:01
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dingyanhua

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你可以做个梯度啊!检测一下哪个温度最合适！你可以做从54度到67度的梯度
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5楼2009-09-17 09:55:49
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dingyanhua

铜虫 (小有名气)
★
amisking(金币+1,VIP+0): 9-17 22:12
应该是54到62度之间的温度梯度刚才打错了
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6楼2009-09-17 09:56:49
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jianhuafly

铜虫 (小有名气)
梯度PCR 很方便
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7楼2009-09-17 10:10:22
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fgwx

金虫 (正式写手)
谢谢了各位虫友，呵呵，刚开始做，不太懂，

学习各位虫友的建议
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8楼2009-09-17 10:37:09
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woaixiaomuchong

铁虫 (初入文坛)
★ ★
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amisking(金币+1,VIP+0): 9-17 22:13
Tm值是 55.6℃  25bp，应该用Tm值低的，可以用54度试一下，Tm值接近的话比较好
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htklz
9楼2009-09-17 17:20:35
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changes

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
从56~63度之间每隔2~3度设个梯度温度试试。PCR这个东西和许多因素都有关。
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10楼2009-09-17 19:19:28
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