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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » PCR温度（请教）
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)
其实退火温度对PCR的影响不是很大，55度就可以。如果没有拉出来的话可以考虑降低一下一下退火温度，还不行的话可以做梯度。
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11楼2009-09-17 21:12:49
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最低的降五度试试 如可以在往上升
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海纳百川止于至善
12楼2009-09-17 21:38:17
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two

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
多查一些相关资料,借鉴一下,自己也测试
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努力快乐着,但生活本不如意
13楼2009-09-17 22:04:47
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ychh521

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般的退火温度比Tm值低4--5度，上游引物和下游引物的Tm值相差最好不要超过2度，你这种情况只有做个梯度比较一下才能知道哪个温度最合适。
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14楼2009-09-18 09:40:48
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yxx41

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
嗯，最方便的就是温度梯度啊，现在差不多的PCR都可以实现这个功能吧
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内事不决问百度，外事不决问Google，横批：wikipedia
15楼2009-09-18 09:45:11
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85xianjia

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
54度开始，每隔一度就要做梯度的
pcr对温度挺敏感的
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16楼2009-09-18 09:45:40
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boystrong

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
PCR没有什么大道理。生物实验有很多的未知，关键去探索，其实我做了很多的PCR实验，退火温度就两者之间选择一个就可以了，中间也行，只要目的条带出来即可
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梦想追风
17楼2009-09-18 09:46:21
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經天

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
一般的PCR引物的TM值比较接近，相差2-3°没有很大关系，这样的退火温度一般比最低的那个tm值低3-5°，你的两个温度相差6.5°，可以先用51或52试试看，P不出来再做梯度PCR。
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一种与世无争的上进，内在的坚毅和质朴无华的大度！【穷吾一生而追求之！】
18楼2009-09-19 19:30:36
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