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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

其实退火温度对PCR的影响不是很大,55度就可以。如果没有拉出来的话可以考虑降低一下一下退火温度,还不行的话可以做梯度。
11楼2009-09-17 21:12:49
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
最低的降五度试试 如可以在往上升
海纳百川止于至善
12楼2009-09-17 21:38:17
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two

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
多查一些相关资料,借鉴一下,自己也测试
努力快乐着,但生活本不如意
13楼2009-09-17 22:04:47
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ychh521

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般的退火温度比Tm值低4--5度,上游引物和下游引物的Tm值相差最好不要超过2度,你这种情况只有做个梯度比较一下才能知道哪个温度最合适。
14楼2009-09-18 09:40:48
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yxx41

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
嗯,最方便的就是温度梯度啊,现在差不多的PCR都可以实现这个功能吧
内事不决问百度,外事不决问Google,横批:wikipedia
15楼2009-09-18 09:45:11
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85xianjia


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
54度开始,每隔一度就要做梯度的
pcr对温度挺敏感的
16楼2009-09-18 09:45:40
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boystrong

银虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
PCR没有什么大道理。生物实验有很多的未知,关键去探索,其实我做了很多的PCR实验,退火温度就两者之间选择一个就可以了,中间也行,只要目的条带出来即可
梦想追风
17楼2009-09-18 09:46:21
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經天

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
一般的PCR引物的TM值比较接近,相差2-3°没有很大关系,这样的退火温度一般比最低的那个tm值低3-5°,你的两个温度相差6.5°,可以先用51或52试试看,P不出来再做梯度PCR。
一种与世无争的上进,内在的坚毅和质朴无华的大度!【穷吾一生而追求之!】
18楼2009-09-19 19:30:36
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