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RVXK27951

新虫 (初入文坛)

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[求助] 最近在做额m13 mp18噬菌体载体构建，遇到以下几个问题...

最近在做额m13 mp18噬菌体载体构建，遇到以下几个问题：
1.噬菌体上有LacZ, 有一篇文献说“M13是LacZa（+）, 因此每轮筛选时选蓝斑，但是加入IPTG/Xgal后不是应该选白斑吗？我涂布出来的平板全部是白斑，没有一个蓝斑（图1），这是为何？
2.做阳性克隆筛选的时候我选取了30来个单菌落，PCR能扩增出目的条带（400bp)，但很弱（图2），然后挑取了能扩增出条带的菌落用生工质粒提取试剂盒提质粒，发现提取不了，没有条带（图3），但是能测出来浓度，引物用的是基因引物；
3.我查了资料有的资料说是要PEG沉淀，得到双链DNA，然后送去测序，我直接用的菌液或者质粒进行测序，测不出来，这是因为我送的样本有问题吗？

@youlinglyw @wizardfan @飞约疯人院 @biostar2009 发自小木虫Android客户端

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1楼 2022-11-29 20:22:10

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