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Mr_K°

新虫 (初入文坛)

[求助] WB实验蛋白印迹形态非常不规则

大家好。本人快开题了,最近在做WB检测内源性蛋白的时候,使用15%蛋白胶,半干转PVDF膜,5%脱脂乳封闭1小时,一抗孵育1小时,2抗孵育1小时,之间均使用TBST洗3次,每次10分钟。显影的时候,条带非常奇怪。请问大家是否遇到过这个现象,希望多给我建议和意见。谢谢。

WB实验蛋白印迹形态非常不规则


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Mr_K°

新虫 (初入文坛)

目的蛋白大概10kDa。蛋白电泳每孔约25微克总蛋白。

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4楼2022-11-14 16:01:36
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NatureBios

金虫 (正式写手)

这个就是蛋白量大了,往下跑的时候,左右扩散导致了蛋白牵手现象,可以降低蛋白上样量,用15的分离胶那是小分子量,电压可以低一点往下跑,凝胶凝固时间延长一些

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免疫学实验技术,杭州荟丹(NatureBiosciences)(科研抗体试剂)技术支持
2楼2022-11-14 15:58:33
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Mr_K°

新虫 (初入文坛)

使用的胶是一步法制胶试剂盒。120V电压全程电泳。

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3楼2022-11-14 15:59:32
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Mr_K°

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by NatureBios at 2022-11-14 15:58:33
这个就是蛋白量大了,往下跑的时候,左右扩散导致了蛋白牵手现象,可以降低蛋白上样量,用15的分离胶那是小分子量,电压可以低一点往下跑,凝胶凝固时间延长一些

感谢您的帮助,本次检测的蛋白大概10kDa。我今晚减少上样量试试。谢谢!

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5楼2022-11-14 16:07:14
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