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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR退火温度高于延伸温度
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leo0615

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR退火温度高于延伸温度 已有2人参与

应实验要求，所设计的引物长度28nt且gc值含量高于60%，这就导致pcr退火温度高于延伸温度，那pcr程序该如何设计

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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1楼 2022-11-01 22:49:03
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AD_com

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

正常的三步法就行，设个60度的退火即可，再不放心就两步法，退火和延伸合二为一。用不着楼上说的论七八糟的方法，而且退火温度只是保证你的引物和模板结合，只要低于一定的温度，能结合就行，低到什么程度完全没什么影响，无非是最终杂带可能会有点而已，那又如何？
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6楼2022-11-07 10:16:25
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不用从程序上优化，体系上可以优化，市面上有现成的产品，你可以自己去买现成的，或者你自己去尝试加二甲亚砜
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2楼2022-11-02 08:49:15
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leo0615

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by shuaibia6 at 2022-11-02 08:49:15
不用从程序上优化，体系上可以优化，市面上有现成的产品，你可以自己去买现成的，或者你自己去尝试加二甲亚砜

能细说嘛

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3楼2022-11-02 17:15:11
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by leo0615 at 2022-11-02 17:15:11
能细说嘛
...

pcr enhance,市面上产品很多
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4楼2022-11-03 08:58:14
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