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leo0615

新虫 (初入文坛)

[求助] PCR退火温度高于延伸温度 已有2人参与

应实验要求,所设计的引物长度28nt且gc值含量高于60%,这就导致pcr退火温度高于延伸温度,那pcr程序该如何设计

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不用从程序上优化,体系上可以优化,市面上有现成的产品,你可以自己去买现成的,或者你自己去尝试加二甲亚砜
2楼2022-11-02 08:49:15
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leo0615

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by shuaibia6 at 2022-11-02 08:49:15
不用从程序上优化,体系上可以优化,市面上有现成的产品,你可以自己去买现成的,或者你自己去尝试加二甲亚砜

能细说嘛

发自小木虫Android客户端
3楼2022-11-02 17:15:11
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by leo0615 at 2022-11-02 17:15:11
能细说嘛
...

pcr enhance,市面上产品很多
4楼2022-11-03 08:58:14
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leo0615

新虫 (初入文坛)

5楼2022-11-03 15:43:59
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金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

正常的三步法就行,设个60度的退火即可,再不放心就两步法,退火和延伸合二为一。用不着楼上说的论七八糟的方法,而且退火温度只是保证你的引物和模板结合,只要低于一定的温度,能结合就行,低到什么程度完全没什么影响,无非是最终杂带可能会有点而已,那又如何?
6楼2022-11-07 10:16:25
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