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【求助】SEC-HPLC中遇到的问题
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各位虫子们,我最近在做方法验证--SEC-HPLC检测样品中高分子杂质,柱子是TSK SWxl3000,流速0.6min/ml,样品出峰时间在~15min,HPLC是手动进样。 1. 在耐用性研究中,检测样品在室温的稳定性,将样品放在室温24h,对样品进行检测,发现在21min出现一降解峰。 2. 之后开始检测限实验,就发现每一针都在21min出现一个峰,怀疑是柱子吸附蛋白,冲洗柱子后,依然在21min出峰;怀疑进样阀不干净; 3. 冲洗进样阀后,直接将进样阀有Load转到Inject,什么样品都不进,结果基线平稳,无峰出现;接着进一针水,一针流动相,均在21min出峰;怀疑是否是进样针污染; 4. 换了一个进样针,21min出峰 注:1. 样品缓冲液的出峰时间在~20min; 2. 21min峰的峰面积忽大忽小。 有哪位虫子可以帮我解决一下这个问题,不甚感激。 |
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