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新虫 (初入文坛)

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[交流] 血管形成实验的步骤已有1人参与

我们将以小鼠动脉内皮细胞为例,对细胞血管形成实验进行简单阐述。

细胞血管形成实验操作步骤如下:

1. 基质胶准备:实验前一天将Matrigel置于冰盒中,放入4℃冰箱过夜,使胶能过夜缓慢融化。(注意:同样要准备一些4℃预冷的枪头用于吸取Matrigel);

2. 凝胶:第二天待matrigel冻融后,准备进行分装,matrigel用预冷枪头混匀,EP管提前预冷,每500uL分装,在操作过程中要将Matrigel始终保持放在冰盒中;

3. 铺胶:96孔板提前预冷,取50μL/孔Matrigel基质胶加入96孔板中,加入时避免产生气泡,置于细胞培养箱中60min待其凝固;

4. 收集细胞:加入1mL含EDTA的胰酶消化细胞,待消化完全后,加入含血清培养液终止消化,计数后用培养基重悬细胞并调整细胞密度为1-2×104个/mL;

5. 待胶凝固后,取出96孔板,每孔加入100μL细胞悬液,做好标记后放入细胞培养箱常规培养;

6. 细胞常规培养2h至24h期间在镜下观察并拍照;

7. 结果分析:100X显微镜下随机选取5个视野观察计数血管内皮细胞成管数量。成管率=实验组成管数量/对照组成管数量*100%。

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