应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 不同时期纯化所得的同一蛋白的温度稳定性差异很大
51/1返回列表
查看: 638  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者draxlx将赠送您 10 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

draxlx

新虫 (小有名气)

[求助] 不同时期纯化所得的同一蛋白的温度稳定性差异很大 已有1人参与

诚心求助
我构建的一个重组质粒所表达的蛋白（酶）有较好的耐热性能，具体表现:在较高温度(35-55℃)水浴保温8h后仍有不同程度的酶活力。
当我再次纯化该蛋白复测耐热性能时，在35℃就失活了。
（没有人为的拿错菌、拿酶液等低级错误）
各位大佬朋友们，有没有出现过同样情况的。
同一个蛋白不同批次纯化出来性质会有这么大的不同吗？

@天使托 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-09-16 21:58:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by draxlx at 2022-09-18 10:48:24
蛋白胶没有问题的。如果是什么因素导致目的蛋白被水解了，那应该直接表现为失去酶活，不应该单单只在耐热性能上出差错啊。
...

如果是水解酶导致蛋白水解，这个过程是逐渐的，而不是一下子全部没有活性，温度越高，水解速率越快，体现为酶的活性下降或者无活性。

该蛋白活性需要cofactor，不同纯化批次导致cofactor差异，导致蛋白热稳定性不同？

这是什么蛋白，催化什么反应，反应buffer里面含有什么等等，这些信息对分析问题会非常有帮助，good luck
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
4楼2022-09-18 12:18:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
信息很少，有没有可能里面含有水解酶，第一次纯化较干净，第二次含有水解酶把你的目的蛋白降解了？ 电泳看一下？
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
2楼2022-09-17 09:40:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

draxlx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2022-09-17 09:40:10
信息很少，有没有可能里面含有水解酶，第一次纯化较干净，第二次含有水解酶把你的目的蛋白降解了？ 电泳看一下？

蛋白胶没有问题的。如果是什么因素导致目的蛋白被水解了，那应该直接表现为失去酶活，不应该单单只在耐热性能上出差错啊。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2022-09-18 10:48:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售渎SCI文章，我:8⊙ 55 1⊙ 54。备注【⊙=0】 +3 vs9ky3szrj 2026-03-06 3/150 2026-03-07 12:24 by 68vlfw6g5q
[考研] 材料化工求调剂 +5 博斯特525 2026-03-06 6/300 2026-03-07 11:04 by 哩哩ll
[考博] 2026年博士名额捡漏 +4 科研ya 2026-03-04 7/350 2026-03-06 16:05 by 科研ya
[考研] 085600材料与化工（高分子）290分求调剂 +9 wengyujian 2026-03-04 9/450 2026-03-06 15:59 by 聪明的大松鼠
[考研] 0703 东华大学 理学化学均过 a 线，总分 281 求调剂 +6 香香 Lu 2026-03-03 11/550 2026-03-06 15:37 by @飒飒飒飒
[考博] 2026申博自荐 六级440电催化方向 +4 樱落成影花成双 2026-03-05 4/200 2026-03-06 07:57 by L135790
[考研] 材料与化工304求调剂 +7 邱gl 2026-03-05 10/500 2026-03-06 01:11 by 卷柏卷柏
[考研] 求调剂，学校研究所都可以，材料与化工267分 +6 wmx1 2026-03-05 6/300 2026-03-05 20:01 by houyaoxu
[考研] 没上岸的看过来 +3 tangxiaotian 2026-03-01 5/250 2026-03-05 13:56 by tangxiaotian
[考研] 302材料工程求调剂 +7 Doleres 2026-03-01 8/400 2026-03-05 09:59 by oxidpl
[考研] 材料专硕346求调剂 +3 旺一下 2026-03-04 3/150 2026-03-04 16:26 by sslc1985
[考研] 一志愿西交大材料学硕 346 求调剂 +3 zju51 2026-03-04 3/150 2026-03-04 13:01 by zhukairuo
[考研] 281求调剂 +3 Y?l?h 2026-03-04 3/150 2026-03-04 10:51 by 汪！？！
[考研] 268求调剂 +6 好运连绵不绝 2026-03-02 6/300 2026-03-03 13:03 by 秋收
[考研] 材料工程专硕283求调剂 5+8 ，！？ 2026-03-02 10/500 2026-03-03 12:01 by EBSD
[考研] 271求调剂 +4 Ricardo1113 2026-03-02 4/200 2026-03-03 08:00 by 无际的草原
[考研] 295求调剂。一志愿报考郑州大学化学工艺学硕，总分295分 +8 yl1 2026-03-02 9/450 2026-03-02 21:21 by sunny81
[考研] 261求调剂 +3 陆lh 2026-03-01 3/150 2026-03-02 19:32 by zhukairuo
[考研] 279求调剂 +3 dua1 2026-03-01 4/200 2026-03-02 00:23 by 大脸蛋子
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭