24小时热门版块排行榜    

查看: 631  |  回复: 3
【悬赏金币】回答本帖问题,作者draxlx将赠送您 10 个金币

draxlx

新虫 (小有名气)

[求助] 不同时期纯化所得的同一蛋白的温度稳定性差异很大 已有1人参与

诚心求助
我构建的一个重组质粒所表达的蛋白(酶)有较好的耐热性能,具体表现:在较高温度(35-55℃)水浴保温8h后仍有不同程度的酶活力。
当我再次纯化该蛋白复测耐热性能时,在35℃就失活了。
(没有人为的拿错菌、拿酶液等低级错误)
各位大佬朋友们,有没有出现过同样情况的。
同一个蛋白不同批次纯化出来性质会有这么大的不同吗?

@天使托 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
信息很少,有没有可能里面含有水解酶,第一次纯化较干净,第二次含有水解酶把你的目的蛋白降解了? 电泳看一下?
行至水穷处,坐看云起时
2楼2022-09-17 09:40:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

draxlx

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2022-09-17 09:40:10
信息很少,有没有可能里面含有水解酶,第一次纯化较干净,第二次含有水解酶把你的目的蛋白降解了? 电泳看一下?

蛋白胶没有问题的。如果是什么因素导致目的蛋白被水解了,那应该直接表现为失去酶活,不应该单单只在耐热性能上出差错啊。

发自小木虫Android客户端
3楼2022-09-18 10:48:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by draxlx at 2022-09-18 10:48:24
蛋白胶没有问题的。如果是什么因素导致目的蛋白被水解了,那应该直接表现为失去酶活,不应该单单只在耐热性能上出差错啊。
...

如果是水解酶导致蛋白水解,这个过程是逐渐的,而不是一下子全部没有活性,温度越高,水解速率越快,体现为酶的活性下降或者无活性。

该蛋白活性需要cofactor,不同纯化批次导致cofactor差异,导致蛋白热稳定性不同?

这是什么蛋白,催化什么反应,反应buffer里面含有什么等等,这些信息对分析问题会非常有帮助,good luck
行至水穷处,坐看云起时
4楼2022-09-18 12:18:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 draxlx 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 298求调剂 +7 axyz3 2026-02-28 8/400 2026-03-03 06:11 by tgxtgxtgx9
[考研] 085600 英一数二272求调剂 5+6 vida_a 2026-03-01 21/1050 2026-03-03 06:06 by tgxtgxtgx9
[考研] 276求调剂 +6 路lyh123 2026-02-28 7/350 2026-03-02 23:51 by hcy618
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +4 gaoxiaoniuma 2026-02-28 6/300 2026-03-02 22:29 by gaoxiaoniuma
[考研] 材料化工调剂 +13 今夏不夏 2026-03-01 16/800 2026-03-02 22:11 by sunny81
[考研] 求调剂 +3 Guo_yuxuan 2026-03-02 4/200 2026-03-02 21:18 by 无际的草原
[考研] 理学,工学,农学调剂,少走弯路,这里欢迎您! +5 likeihood 2026-03-02 8/400 2026-03-02 20:39 by ji493940045
[考研] 0856材料求调剂 +12 hyf hyf hyf 2026-02-28 13/650 2026-03-02 20:19 by hypershenger
[考研] 0805总分292,求调剂 +10 幻想之殇 2026-03-01 10/500 2026-03-02 19:51 by zhukairuo
[考研] 0854总分272 +3 打小就是老实人 2026-03-02 4/200 2026-03-02 19:49 by 求调剂zz
[考研] 一志愿中石油(华东)本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-02 3/150 2026-03-02 18:54 by caszguilin
[考研] 一志愿华南理工大学材料与化工326分,求调剂 +3 wujinrui1 2026-02-28 3/150 2026-03-02 16:36 by chuocheng
[考研] 303求调剂 +5 今夏不夏 2026-03-01 5/250 2026-03-02 15:01 by 向上的胖东
[考研] 化工专硕342,一志愿大连理工大学,求调剂 +6 kyf化工 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:56 by 无际的草原
[考研] 材料工程269求调剂 +3 白刺玫 2026-03-02 3/150 2026-03-02 09:25 by 一休哥FU
[考研] 322求调剂 +3 熊境喆 2026-03-01 3/150 2026-03-02 08:44 by houyaoxu
[基金申请] 成果系统访问量大,请一小时后再尝试。---NSFC啥时候好哦,已经两天这样了 +4 NSFC2026我来了 2026-02-28 4/200 2026-03-01 22:37 by 铁门栓
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考博] 26申博 +4 想申博! 2026-02-26 6/300 2026-03-01 17:32 by 想申博!
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
信息提示
请填处理意见