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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 不同时期纯化所得的同一蛋白的温度稳定性差异很大
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draxlx

新虫 (小有名气)

[求助] 不同时期纯化所得的同一蛋白的温度稳定性差异很大 已有1人参与

诚心求助
我构建的一个重组质粒所表达的蛋白（酶）有较好的耐热性能，具体表现:在较高温度(35-55℃)水浴保温8h后仍有不同程度的酶活力。
当我再次纯化该蛋白复测耐热性能时，在35℃就失活了。
（没有人为的拿错菌、拿酶液等低级错误）
各位大佬朋友们，有没有出现过同样情况的。
同一个蛋白不同批次纯化出来性质会有这么大的不同吗？

@天使托 发自小木虫Android客户端
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1楼 2022-09-16 21:58:36
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
信息很少，有没有可能里面含有水解酶，第一次纯化较干净，第二次含有水解酶把你的目的蛋白降解了？ 电泳看一下？
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行至水穷处，坐看云起时
2楼2022-09-17 09:40:10
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draxlx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2022-09-17 09:40:10
信息很少，有没有可能里面含有水解酶，第一次纯化较干净，第二次含有水解酶把你的目的蛋白降解了？ 电泳看一下？

蛋白胶没有问题的。如果是什么因素导致目的蛋白被水解了，那应该直接表现为失去酶活，不应该单单只在耐热性能上出差错啊。

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3楼2022-09-18 10:48:24
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pennchem

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by draxlx at 2022-09-18 10:48:24
蛋白胶没有问题的。如果是什么因素导致目的蛋白被水解了，那应该直接表现为失去酶活，不应该单单只在耐热性能上出差错啊。
...

如果是水解酶导致蛋白水解，这个过程是逐渐的，而不是一下子全部没有活性，温度越高，水解速率越快，体现为酶的活性下降或者无活性。

该蛋白活性需要cofactor，不同纯化批次导致cofactor差异，导致蛋白热稳定性不同？

这是什么蛋白，催化什么反应，反应buffer里面含有什么等等，这些信息对分析问题会非常有帮助，good luck
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行至水穷处，坐看云起时
4楼2022-09-18 12:18:40
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