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draxlx

新虫 (小有名气)

[求助] 不同时期纯化所得的同一蛋白的温度稳定性差异很大 已有1人参与

诚心求助
我构建的一个重组质粒所表达的蛋白(酶)有较好的耐热性能,具体表现:在较高温度(35-55℃)水浴保温8h后仍有不同程度的酶活力。
当我再次纯化该蛋白复测耐热性能时,在35℃就失活了。
(没有人为的拿错菌、拿酶液等低级错误)
各位大佬朋友们,有没有出现过同样情况的。
同一个蛋白不同批次纯化出来性质会有这么大的不同吗?

@天使托 发自小木虫Android客户端
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
信息很少,有没有可能里面含有水解酶,第一次纯化较干净,第二次含有水解酶把你的目的蛋白降解了? 电泳看一下?
行至水穷处,坐看云起时
2楼2022-09-17 09:40:10
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draxlx

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2022-09-17 09:40:10
信息很少,有没有可能里面含有水解酶,第一次纯化较干净,第二次含有水解酶把你的目的蛋白降解了? 电泳看一下?

蛋白胶没有问题的。如果是什么因素导致目的蛋白被水解了,那应该直接表现为失去酶活,不应该单单只在耐热性能上出差错啊。

发自小木虫Android客户端
3楼2022-09-18 10:48:24
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by draxlx at 2022-09-18 10:48:24
蛋白胶没有问题的。如果是什么因素导致目的蛋白被水解了,那应该直接表现为失去酶活,不应该单单只在耐热性能上出差错啊。
...

如果是水解酶导致蛋白水解,这个过程是逐渐的,而不是一下子全部没有活性,温度越高,水解速率越快,体现为酶的活性下降或者无活性。

该蛋白活性需要cofactor,不同纯化批次导致cofactor差异,导致蛋白热稳定性不同?

这是什么蛋白,催化什么反应,反应buffer里面含有什么等等,这些信息对分析问题会非常有帮助,good luck
行至水穷处,坐看云起时
4楼2022-09-18 12:18:40
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