应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 不同时期纯化所得的同一蛋白的温度稳定性差异很大
41/1返回列表
查看: 640  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者draxlx将赠送您 10 个金币

draxlx

新虫 (小有名气)

[求助] 不同时期纯化所得的同一蛋白的温度稳定性差异很大 已有1人参与

诚心求助
我构建的一个重组质粒所表达的蛋白（酶）有较好的耐热性能，具体表现:在较高温度(35-55℃)水浴保温8h后仍有不同程度的酶活力。
当我再次纯化该蛋白复测耐热性能时，在35℃就失活了。
（没有人为的拿错菌、拿酶液等低级错误）
各位大佬朋友们，有没有出现过同样情况的。
同一个蛋白不同批次纯化出来性质会有这么大的不同吗？

@天使托 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2022-09-16 21:58:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
信息很少，有没有可能里面含有水解酶，第一次纯化较干净，第二次含有水解酶把你的目的蛋白降解了？ 电泳看一下？
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
2楼2022-09-17 09:40:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

draxlx

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by pennchem at 2022-09-17 09:40:10
信息很少，有没有可能里面含有水解酶，第一次纯化较干净，第二次含有水解酶把你的目的蛋白降解了？ 电泳看一下？

蛋白胶没有问题的。如果是什么因素导致目的蛋白被水解了，那应该直接表现为失去酶活，不应该单单只在耐热性能上出差错啊。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2022-09-18 10:48:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by draxlx at 2022-09-18 10:48:24
蛋白胶没有问题的。如果是什么因素导致目的蛋白被水解了，那应该直接表现为失去酶活，不应该单单只在耐热性能上出差错啊。
...

如果是水解酶导致蛋白水解，这个过程是逐渐的，而不是一下子全部没有活性，温度越高，水解速率越快，体现为酶的活性下降或者无活性。

该蛋白活性需要cofactor，不同纯化批次导致cofactor差异，导致蛋白热稳定性不同？

这是什么蛋白，催化什么反应，反应buffer里面含有什么等等，这些信息对分析问题会非常有帮助，good luck
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
4楼2022-09-18 12:18:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 draxlx 的主题更新
41/1返回列表
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 290 材料与化工求调剂 +3 Nebulala 2026-03-08 3/150 2026-03-08 15:45 by 吃骨头的欢欢丫
[考研] 理学287分求调剂 +3 看看我. 2026-03-05 3/150 2026-03-08 08:11 by 314126402
[考研] 085701环境工程317分求调剂 +9 6汆尼9 2026-03-07 9/450 2026-03-08 06:41 by 刘兵
[考研] 0703化学求调剂学校 +3 一志愿京区211 2026-03-04 3/150 2026-03-07 21:35 by yinhuanshun
[考研] 085701环境工程295求调剂，一志愿A区211 +7 等春来， 2026-03-06 8/400 2026-03-06 22:04 by 星空星月
[考研] 复试调剂 +7 呼呼？~+123456 2026-03-05 10/500 2026-03-06 16:07 by @飒飒飒飒
[考研] 287求调剂 +3 看看我. 2026-03-05 6/300 2026-03-06 10:40 by Iveryant
[考研] 求调剂 +5 danyyyy 2026-03-04 5/250 2026-03-06 08:16 by Leeding1356
[考研] 材料与化工304求调剂 +7 邱gl 2026-03-05 10/500 2026-03-06 01:11 by 卷柏卷柏
[考研] 材料考研339求调剂 +3 Karry*^_^* 2026-03-04 3/150 2026-03-06 00:32 by wutongshun
[考研] 080500材料科学与工程 +13 202114020319 2026-03-03 13/650 2026-03-06 00:29 by wutongshun
[考研] 材料调剂 +4 L9370 2026-03-05 4/200 2026-03-05 19:36 by caszguilin
[考研] 一志愿西交化工专硕288专业课93求调剂 +6 好运好运接接 2026-03-04 6/300 2026-03-05 09:36 by houyaoxu
[考研] 0856材料与化工，270求调剂 +17 YXCT 2026-03-01 20/1000 2026-03-05 09:22 by 一切OK
[论文投稿] 主编终审卡者不动 100+4 Stray2021 2026-03-03 4/200 2026-03-05 08:04 by bdhaoxiang
[考研] 307求调剂 +4 xuyuan111 2026-03-04 5/250 2026-03-04 20:39 by kakakapanpan
[考研] 281求调剂 +3 我是小小葱葱 2026-03-03 5/250 2026-03-04 14:23 by kakakapanpan
[考研] 281求调剂 +3 Y?l?h 2026-03-04 3/150 2026-03-04 10:51 by 汪！？！
[考研] 环境调剂 +8 chenhanheng 2026-03-02 8/400 2026-03-03 22:13 by 刘兵
[基金申请] 此成果不能导入原因：元数据必填信息不完整，可 进行补充。 +4 Kittylucky 2026-03-02 5/250 2026-03-02 11:07 by jurkat.1640
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭