24小时热门版块排行榜

返回列表

当前主题已经存档。

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zhangn516

应助: (幼儿园)
在线:
虫号: 761433

[交流] 转化总是有问题。。。大家帮忙看看。。。（已关闭）

每次转化涂板以后第二天来看都会发生没长，或者长的很少。。。连质粒也会有这种情况。。。想问问大家转化过程中要特别注意什么问题。。。

比如说我昨晚转的质粒，0.5 ul转到50ul JM109中，冰浴30min，热激1min30sec，冰浴1-2min，转到350 ul SOC中，摇了快一个小时，涂板。。。

早上来了一看，发现同时做的两个质粒，一个长得还行，一个只长了3个左右。。。郁闷的不行。。。

感谢各位虫友，看来木虫真的是个很好的交流的地方。。。
我后来知道了，那个质粒没有amp抗性

。。。（推卸一下责任，师兄给我的，就没说。。。他后来才想起来的。。。）

[ Last edited by zhangn516 on 2009-9-14 at 18:59 ]

回复此楼

» 猜你喜欢

博士读完未来一定会好吗已经有21人回复
导师想让我从独立一作变成了共一第一已经有5人回复
到新单位后，换了新的研究方向，没有团队，持续积累2区以上论文，能申请到面上吗已经有11人回复
读博已经有4人回复
JMPT 期刊投稿流程已经有4人回复
心脉受损已经有5人回复
Springer期刊投稿求助已经有4人回复
小论文投稿已经有3人回复
Bioresource Technology期刊，第一次返修的时候被退回好几次了已经有9人回复
申请2026年博士已经有6人回复

1楼2009-09-13 10:34:53

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

BioEPI: 8
应助: 24 (小学生)
贵宾: 1.2
金币: 113951
散金: 1526
红花: 224
沙发: 1
帖子: 28917
在线: 3664.3小时
虫号: 464575
注册: 2007-11-21
性别: GG
专业: 神经生物学

★ ★ ★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-14 18:55
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-14 18:57

引用回帖:

Originally posted by plantst5928 at 2009-9-13 19:53:
复苏之后的离心是很有必要的，一般就是4000g，4min。之后把上层的培养基吸出，剩余100ul左右，用枪把菌吹打起来，直接涂板子。
如果是两个长得不均匀，可能是感受态的问题，你是不是从一个小管里把感受态分装到2 ...

转化质粒我都是最后涂布10ul，最多50ul，已经是很密了。要是离心涂布100ul的

话，好的感受态你是挑不出单菌落了。

SOC加10倍的量，转化后加SOC的时候不要用枪来回猛烈打，动作轻柔些。

一般情况下，我的平板都是提前倒好，4度冰箱倒放保存的，这样的话你涂

布100ul，很快就吸干了。

有的实验室转化质粒后都不复苏的，直接拿来涂布一样能长的，不过时间长一

些，最后长的少而已。

你用相同的质粒，你转化一个，别人转化一个，同样的方法两个人做，看最后有

什么差别不。

另外楼上说的冰上放置30min融化，其实用不了那么长时间，100ul的感受态7-8min

就融化了。

[ Last edited by brightfuture01 on 2009-9-14 at 02:17 ]