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zhangn516

[交流] 转化总是有问题。。。大家帮忙看看。。。(已关闭)

每次转化涂板以后第二天来看都会发生没长,或者长的很少。。。连质粒也会有这种情况。。。想问问大家转化过程中要特别注意什么问题。。。

比如说我昨晚转的质粒,0.5 ul转到50ul JM109中,冰浴30min,热激1min30sec,冰浴1-2min,转到350 ul SOC中,摇了快一个小时,涂板。。。

早上来了一看,发现同时做的两个质粒,一个长得还行,一个只长了3个左右。。。郁闷的不行。。。


感谢各位虫友,看来木虫真的是个很好的交流的地方。。。
我后来知道了,那个质粒没有amp抗性。。。(推卸一下责任,师兄给我的,就没说。。。他后来才想起来的。。。)

[ Last edited by zhangn516 on 2009-9-14 at 18:59 ]
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


生命核心(金币+1,VIP+0):谢谢交流! 9-13 16:54
我加SOC的时候都是按照至少10的量来加的。质粒应该很好转的,可能是你的感受态

做的不是很好。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-09-13 10:39:09
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w.king124

金虫 (正式写手)



生命核心(金币+1,VIP+0):谢谢交流! 9-13 16:54
连质粒都长的这么少,肯定是感受态做的不好了
建议重做感受态
3楼2009-09-13 11:41:07
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zdf68

新虫 (正式写手)

重做感受态
4楼2009-09-13 11:45:45
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zhangn516

感谢楼上三位。。。感受态应该是没有问题的。。。因为别人用或者我另一个质粒都还行。。。

我就不知道转化过程中有什么操作室致命的。。。让我很郁闷。。。

还有2楼你说SOC加10是指十倍的吗?

最后大家需要离心浓缩细胞然后再涂板吗?
5楼2009-09-13 12:47:22
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xiangao

金虫 (正式写手)

没必要离心浓缩,一平板最多加200ul,浓缩可能对细胞有伤害
6楼2009-09-13 12:58:08
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zhangn516

引用回帖:
Originally posted by xiangao at 2009-9-13 12:58:
没必要离心浓缩,一平板最多加200ul,浓缩可能对细胞有伤害

我昨天涂了150+45的Xgal和IPTG,半天吸收不了。。。急都急死了。。。
7楼2009-09-13 13:38:57
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yituyitu

木虫 (正式写手)

太多了吧。。。
引用回帖:
Originally posted by zhangn516 at 2009-9-13 13:38:



我昨天涂了150+45的Xgal和IPTG,半天吸收不了。。。急都急死了。。。

8楼2009-09-13 13:40:06
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zhangn516

引用回帖:
Originally posted by yituyitu at 2009-9-13 13:40:
太多了吧。。。

5楼说涂200啊。。。
9楼2009-09-13 13:46:44
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

引用回帖:
Originally posted by zhangn516 at 2009-9-13 13:46:



5楼说涂200啊。。。

5楼说涂200是指转化产物。
Thank-you,so-blue.
10楼2009-09-13 15:17:21
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