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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 转化总是有问题。。。大家帮忙看看。。。（已关闭）
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zhangn516

[交流] 转化总是有问题。。。大家帮忙看看。。。（已关闭）

每次转化涂板以后第二天来看都会发生没长，或者长的很少。。。连质粒也会有这种情况。。。想问问大家转化过程中要特别注意什么问题。。。

比如说我昨晚转的质粒，0.5 ul转到50ul JM109中，冰浴30min，热激1min30sec，冰浴1-2min，转到350 ul SOC中，摇了快一个小时，涂板。。。

早上来了一看，发现同时做的两个质粒，一个长得还行，一个只长了3个左右。。。郁闷的不行。。。


感谢各位虫友，看来木虫真的是个很好的交流的地方。。。
我后来知道了，那个质粒没有amp抗性。。。（推卸一下责任，师兄给我的，就没说。。。他后来才想起来的。。。）

[ Last edited by zhangn516 on 2009-9-14 at 18:59 ]
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1楼 2009-09-13 10:34:53
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
生命核心(金币+1,VIP+0):谢谢交流！ 9-13 16:54
我加SOC的时候都是按照至少10的量来加的。质粒应该很好转的，可能是你的感受态

做的不是很好。
赞一下(6人) 回复此楼
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2009-09-13 10:39:09
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w.king124

金虫 (正式写手)
★
生命核心(金币+1,VIP+0):谢谢交流！ 9-13 16:54
连质粒都长的这么少，肯定是感受态做的不好了
建议重做感受态
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3楼2009-09-13 11:41:07
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zdf68

新虫 (正式写手)
重做感受态
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4楼2009-09-13 11:45:45
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zhangn516

感谢楼上三位。。。感受态应该是没有问题的。。。因为别人用或者我另一个质粒都还行。。。

我就不知道转化过程中有什么操作室致命的。。。让我很郁闷。。。

还有2楼你说SOC加10是指十倍的吗？

最后大家需要离心浓缩细胞然后再涂板吗？
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5楼2009-09-13 12:47:22
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xiangao

金虫 (正式写手)
没必要离心浓缩，一平板最多加200ul,浓缩可能对细胞有伤害
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6楼2009-09-13 12:58:08
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zhangn516

引用回帖:
Originally posted by xiangao at 2009-9-13 12:58:
没必要离心浓缩，一平板最多加200ul,浓缩可能对细胞有伤害

我昨天涂了150+45的Xgal和IPTG，半天吸收不了。。。急都急死了。。。
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7楼2009-09-13 13:38:57
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yituyitu

木虫 (正式写手)
太多了吧。。。
引用回帖:
Originally posted by zhangn516 at 2009-9-13 13:38:



我昨天涂了150+45的Xgal和IPTG，半天吸收不了。。。急都急死了。。。

回复此楼
8楼2009-09-13 13:40:06
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zhangn516

引用回帖:
Originally posted by yituyitu at 2009-9-13 13:40:
太多了吧。。。

5楼说涂200啊。。。
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9楼2009-09-13 13:46:44
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
引用回帖:
Originally posted by zhangn516 at 2009-9-13 13:46:



5楼说涂200啊。。。

5楼说涂200是指转化产物。
赞一下 回复此楼
Thank-you，so-blue.
10楼2009-09-13 15:17:21
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