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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 转化总是有问题。。。大家帮忙看看。。。（已关闭）
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
请问你的感受态从冰箱拿出来后是否立即放支冰上，然后30min左右自然融化？
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Thank-you，so-blue.
11楼2009-09-13 15:19:49
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plantst5928

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-14 18:54
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-14 18:57
复苏之后的离心是很有必要的，一般就是4000g，4min。之后把上层的培养基吸出，剩余100ul左右，用枪把菌吹打起来，直接涂板子。
如果是两个长得不均匀，可能是感受态的问题，你是不是从一个小管里把感受态分装到2个里面用的？如果是这样，你分装之前要把感受态拨一下，因为菌体可能都沉在下面，不拨匀的话，其中一个势必菌体少。
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12楼2009-09-13 19:53:27
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)
我也遇到过这样的问题，而且电转了好几次都不成，也是电转一个质粒。后来重提了质粒，这次已经长出了菌落，质粒的浓度每一次提取都不一样，建议可以做个梯度试试
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为梦想努力。
13楼2009-09-13 21:49:37
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★ ★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-14 18:55
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-14 18:57
引用回帖:
Originally posted by plantst5928 at 2009-9-13 19:53:
复苏之后的离心是很有必要的，一般就是4000g，4min。之后把上层的培养基吸出，剩余100ul左右，用枪把菌吹打起来，直接涂板子。
如果是两个长得不均匀，可能是感受态的问题，你是不是从一个小管里把感受态分装到2 ...

转化质粒我都是最后涂布10ul，最多50ul，已经是很密了。要是离心涂布100ul的

话，好的感受态你是挑不出单菌落了。

SOC加10倍的量，转化后加SOC的时候不要用枪来回猛烈打，动作轻柔些。

一般情况下，我的平板都是提前倒好，4度冰箱倒放保存的，这样的话你涂

布100ul，很快就吸干了。

有的实验室转化质粒后都不复苏的，直接拿来涂布一样能长的，不过时间长一

些，最后长的少而已。

你用相同的质粒，你转化一个，别人转化一个，同样的方法两个人做，看最后有

什么差别不。

另外楼上说的冰上放置30min融化，其实用不了那么长时间，100ul的感受态7-8min

就融化了。

[ Last edited by brightfuture01 on 2009-9-14 at 02:17 ]
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
14楼2009-09-14 02:15:37
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Nadia_long

新虫 (初入文坛)
楼上几位说得很对，感受态是要在冰上融解的
另外一点我猜想的－－heat shock时间是不是太长了呢？我们实验室都是３０秒
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15楼2009-09-14 09:23:12
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w.king124

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhangn516 at 2009-9-13 13:38:



我昨天涂了150+45的Xgal和IPTG，半天吸收不了。。。急都急死了。。。

最好转化前一天就铺好平板，置于冰箱，会有水珠渗出，以减少水分
如果即铺即做的话，也最好在培养箱里37度放两个小时，让平板的水分损失一部分，涂得时候就会很快干的
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16楼2009-09-14 10:18:12
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paulajjh

木虫 (著名写手)
我觉得还是感受态问题,你说的还行指什么概念?
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17楼2009-09-14 12:25:35
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zhangshh

金虫 (小有名气)
★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-14 18:57
JM109大肠杆菌转化效率高，感受态应该是很好做的，再加大质粒的量试试，我一般加2ul.用200uL感受态。你可能加质粒时没混匀，所以都长一块了。
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18楼2009-09-14 18:49:40
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zhangshh

金虫 (小有名气)
JM109大肠杆菌转化效率高，感受态应该是很好做的，再加大质粒的量试试，我一般加2ul.用200uL感受态。你可能加质粒时没混匀，所以都长一块了。
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19楼2009-09-14 18:51:20
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