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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

请问你的感受态从冰箱拿出来后是否立即放支冰上,然后30min左右自然融化?
Thank-you,so-blue.
11楼2009-09-13 15:19:49
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plantst5928

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-14 18:54
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-14 18:57
复苏之后的离心是很有必要的,一般就是4000g,4min。之后把上层的培养基吸出,剩余100ul左右,用枪把菌吹打起来,直接涂板子。
如果是两个长得不均匀,可能是感受态的问题,你是不是从一个小管里把感受态分装到2个里面用的?如果是这样,你分装之前要把感受态拨一下,因为菌体可能都沉在下面,不拨匀的话,其中一个势必菌体少。
12楼2009-09-13 19:53:27
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zhouzhou_3006

木虫 (著名写手)

我也遇到过这样的问题,而且电转了好几次都不成,也是电转一个质粒。后来重提了质粒,这次已经长出了菌落,质粒的浓度每一次提取都不一样,建议可以做个梯度试试
为梦想努力。
13楼2009-09-13 21:49:37
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★ ★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-14 18:55
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-14 18:57
引用回帖:
Originally posted by plantst5928 at 2009-9-13 19:53:
复苏之后的离心是很有必要的,一般就是4000g,4min。之后把上层的培养基吸出,剩余100ul左右,用枪把菌吹打起来,直接涂板子。
如果是两个长得不均匀,可能是感受态的问题,你是不是从一个小管里把感受态分装到2 ...

转化质粒我都是最后涂布10ul,最多50ul,已经是很密了。要是离心涂布100ul的

话,好的感受态你是挑不出单菌落了。

SOC加10倍的量,转化后加SOC的时候不要用枪来回猛烈打,动作轻柔些。

一般情况下,我的平板都是提前倒好,4度冰箱倒放保存的,这样的话你涂

布100ul,很快就吸干了。

有的实验室转化质粒后都不复苏的,直接拿来涂布一样能长的,不过时间长一

些,最后长的少而已。

你用相同的质粒,你转化一个,别人转化一个,同样的方法两个人做,看最后有

什么差别不。

另外楼上说的冰上放置30min融化,其实用不了那么长时间,100ul的感受态7-8min

就融化了。

[ Last edited by brightfuture01 on 2009-9-14 at 02:17 ]
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
14楼2009-09-14 02:15:37
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Nadia_long

新虫 (初入文坛)

楼上几位说得很对,感受态是要在冰上融解的
另外一点我猜想的--heat shock时间是不是太长了呢?我们实验室都是30秒
15楼2009-09-14 09:23:12
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w.king124

金虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by zhangn516 at 2009-9-13 13:38:



我昨天涂了150+45的Xgal和IPTG,半天吸收不了。。。急都急死了。。。

最好转化前一天就铺好平板,置于冰箱,会有水珠渗出,以减少水分
如果即铺即做的话,也最好在培养箱里37度放两个小时,让平板的水分损失一部分,涂得时候就会很快干的
16楼2009-09-14 10:18:12
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paulajjh

木虫 (著名写手)

我觉得还是感受态问题,你说的还行指什么概念?
17楼2009-09-14 12:25:35
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zhangshh

金虫 (小有名气)

★ ★
zhangn516(金币+2,VIP+0): 9-14 18:57
JM109大肠杆菌转化效率高,感受态应该是很好做的,再加大质粒的量试试,我一般加2ul.用200uL感受态。你可能加质粒时没混匀,所以都长一块了。
18楼2009-09-14 18:49:40
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zhangshh

金虫 (小有名气)

JM109大肠杆菌转化效率高,感受态应该是很好做的,再加大质粒的量试试,我一般加2ul.用200uL感受态。你可能加质粒时没混匀,所以都长一块了。
19楼2009-09-14 18:51:20
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