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yaqian18

新虫 (小有名气)

[求助] 双酶切 已有3人参与

我的重组质粒转化大肠杆菌后提取质粒进行双酶切酶切位点为BamHI和XhoI,为什么我的单酶切和双酶切之后的电泳图一样呢?有条带的第一,第二泳道为双酶切,第三泳道是BamHI的单酶切,第四是没有酶切的质粒,第五泳道是marker

双酶切


@youlinglyw @biostar2009 发自小木虫Android客户端
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金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看一看图谱,是不是某个酶切位点被甲基化
6楼2022-08-17 20:20:07
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乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1.用xho1也单酶切下 看看是不是某个酶失效
2.看酶有没有甲基化位点
3.重新比对序列是否有xho1 bamh
4.换一株阳性转化子重新提质粒 我之前也是单酶切怎么都切不出来 直接换另一株阳性转化子

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我思故我在
2楼2022-08-16 21:44:07
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yaqian18

新虫 (小有名气)

双酶切表达载体就正常,所以应该不是酶失活

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3楼2022-08-16 22:28:09
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
两个酶切位点很近?所以单酶切和双酶切长度差不多
4楼2022-08-17 09:51:24
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