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yaqian18

新虫 (小有名气)

[求助] 双酶切 已有3人参与

我的重组质粒转化大肠杆菌后提取质粒进行双酶切酶切位点为BamHI和XhoI，为什么我的单酶切和双酶切之后的电泳图一样呢？有条带的第一，第二泳道为双酶切，第三泳道是BamHI的单酶切，第四是没有酶切的质粒，第五泳道是marker

双酶切


@youlinglyw @biostar2009 发自小木虫Android客户端
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1楼 2022-08-16 21:12:01
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乌克兰跑男

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.用xho1也单酶切下 看看是不是某个酶失效
2.看酶有没有甲基化位点
3.重新比对序列是否有xho1 bamh
4.换一株阳性转化子重新提质粒 我之前也是单酶切怎么都切不出来 直接换另一株阳性转化子

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我思故我在
2楼2022-08-16 21:44:07
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yaqian18

新虫 (小有名气)
双酶切表达载体就正常，所以应该不是酶失活

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3楼2022-08-16 22:28:09
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
两个酶切位点很近？所以单酶切和双酶切长度差不多
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4楼2022-08-17 09:51:24
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shuaibia6

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

最上面的条带是未酶切的载体，如果双酶切的条带只有小几百或几十bp，载体有大几千上万的话其实双酶切的条带和单酶切电泳看位置的话分不太出来
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5楼2022-08-17 09:55:32
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金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看一看图谱，是不是某个酶切位点被甲基化
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6楼2022-08-17 20:20:07
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